猪囊尾蚴cYI因重组子的建立及表达.pdf

中文摘要 猪囊尾蚴cYI基因重组子的建立及表达 摘 要 目的：本研究采用基因重组技术，构建猪囊尾蚴cYI基 因原核表达载体，观察其在大肠杆菌中的表达情况，为进一 步研究cYI基因的蛋白质结构和功能，从而为开发囊虫病特 异性诊断抗原和基因疫苗提供理论依据。 方法： 1目的基因的获得：以本室保存的猪囊尾蚴进行RNA 的提取，根据已知基因序列设计引物，进行RT-PCR，条件 7℃50 min，56℃ 为：3 min，94℃预变性5min，按94℃1 1min，72℃l 0min，4 min进行30个循环，最后72℃延伸l ℃保存备用。 ，2重组质粒转化感受态菌DE3：ImPCR扩增产物经低 熔点琼脂糖凝胶回收纯化，用NdeI及XhoI末端修饰后与经 相同酶消化、回收的原核高效表达载体pET28b进行体外定 向重组，连接产物转化感受态菌DE3，同