第讲微生物培养.pptVIP

本章内容从命题形式来看，主要以非选择题形式出现，并且试题范围尽量覆盖整个选修教材，知识的覆盖面大。该部分重视考查学生的生物技术实践能力，以及学生对生物技术中的操作步骤和技术要求的了解和运用。命题热点如：以发酵食品为背景考查微生物的分离、纯化和培养过程以及微生物在食品加工所起的作用；结合食品制造和洗涤业考查酶的应用；将植物组织培养的有关知识与植物激素的应用相联系，进行综合考查；以环境污染(如某种有害物质的存在及量的多少)为背景考查微生物的生存条件和培养。 一、微生物的培养与应用 1.培养基 (1)概念：根据微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。 (2)种类： ①按物理性质划分 ②按化学性质划分 ③按培养基用途划分 (3)营养要求 水、碳源、氮源、无机盐等；pH、特殊营养物质； ①大多数微生物主要利用无机氮化合物作为氮源，如NH+4、NO-3，也可利用含氮有机物作为氮源。 ②少数固氮微生物可利用N2作为氮源，如根瘤菌、圆褐固氮菌。 ③对硝化细菌来说，NH3和NO-2同时具有氮源和能源的作用。 ④其他微生物，N2、NH+4、NO-3通常不作为能源，对于异养型微生物而言，含有C、H、O、N的有机物同时具有碳源、氮源与能源的功能。 2.无菌技术 消毒——用较温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子)。 灭菌——使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。 (1)消毒方法 (2)灭菌方法 3.实验操作 (1)配制培养基 计算→称量→溶化→灭菌→倒平板 (2)纯化大肠杆菌 ①平板划线： 通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体。 步骤: 注意事项： 每次划完后须烧一次接种环；使得每次划线的菌种来源于上次的划线，逐步稀释。 ②涂布平板操作： 将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面。 (3)菌种培养 将接种后的培养基倒置放入37 ℃的恒温箱中培养24小时。 (4)实验结果观察 观察不同的菌落，看颜色、菌落的形态等。 (5)菌株的保存方法 ①临时保藏： 斜面培养基，4 ℃保存； ②长期保存： 甘油管藏法，-20 ℃冷冻箱中保存。 二、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 1.筛选菌株 人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。 2.统计菌落数目 (1)依据：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少个活菌。为保证结 果准确，一般选择菌落数在30~300的平板进行计数。 (2)活菌计数法 稀释涂布平板法：统计活菌的数目；挑选菌落数在30～300的平板进行计数。 注：统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。 计算公式： 每克样品中的菌落数=(C÷V)×M (3)显微镜直接计数法 测定微生物数量的常用方法。 (4)过滤膜法 如饮用水中大肠杆菌的数目测定。 三、分解纤维素的微生物的分离 1.原理： (1)刚果红可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。 (2)纤维素分解菌能产生纤维素酶分解纤维素，从而使菌落周围形成透明圈。 2.流程： 土壤取样→选择培养→梯度稀释→将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上→挑选产生透明圈的菌落。 3.注意： (1)纤维素分解菌的选择培养基为液体培养基，因培养基中无凝固剂，利用液体培养基以增加纤维素分解菌的浓度。 (2)为确定得到的菌是否是纤维素分解菌，还需要进行发酵产纤维素酶的实验。纤维素酶的发酵方法有液体发酵和固体发酵两种。纤维素酶的测定方法，一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行定量测定。 1.自养微生物和异养微生物的营养比较 2.平板划线和稀释涂布平板法注意事项 （1）平板划线法：操作简单，但是单菌落不易分离。 ①无菌操作：操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环，在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环。 ②灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线，以免接种温度过高，杀死菌种。 ③由于划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线末端开始，能使 细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 (2)稀释涂布平板法：操作复杂，但是单菌落易分离。 ①无菌操作：涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。应从操作的各个环节保证“无菌”。 ②每个稀释度下涂布三个平板作为重复组，不同稀释浓度下涂布的平板形成对照组，且每个平板所用的菌液不超过0.1毫升。 ③统计实验结果时，