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第三节 食品卫生细菌学菌落总数的检验技术 一、菌落总数的定义 二、菌落总数检验的意义 三、菌落总数的报告方式 四、菌落总数的检验方法 五、细菌菌落总数测定的其他方法 六、非常见细菌菌落总数的测定方法 一、菌落总数的定义 菌落总数是指在被检样品的单位质量(g)、容积(mL)或表面积(cm2)内，在一定条件下培养后所生成的细菌菌落的总数。 二、菌落总数检验的意义 三、菌落总数的报告方式 四、菌落总数的检验方法 1、检测常用器材 营养琼脂、恒温培养箱、托盘天平、吸管、三角瓶、玻璃珠、平皿、试管、均质器或乳钵等。 四、菌落总数的检验方法 四、菌落总数的检验方法 3、操作方法 （1）检样稀释及培养 四、菌落总数的检验方法 （2）菌落计数方法 做平皿菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平皿的菌落总数后，求出同稀释度的各平皿平均菌落数。到达规定培养时间，应立即计数。 四、菌落总数的检验方法 （3）菌落计数的报告 ①平板菌落数的选择 选取菌落数在30~300之间的平皿作为菌落总数测定标准。应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的菌落数。如果平板内有链状菌落生长，若仅一条链，则视为一个菌落；若有不同来源的几条链，则视每一条链为一个菌落。 四、菌落总数的检验方法 （3）菌落计数的报告 ②稀释度的选择 四、菌落总数的检验方法 （3）菌落计数的报告 ③菌落数的报告 菌落数在100以内时，按其实有数报告，大于100时，以四舍五入法采用两位有效数字报告。也可用10的指数来表示。 四、菌落总数的检验方法 （4）注意事项 ①检验中所需玻璃仪器必须是完全灭菌的，并在灭菌前彻底清洗干净，不得有残留物。用作样品稀释的液体，每批都要有空白对照。必要时追加对照平板， ②检样的稀释液可用灭菌盐水或蒸馏水。 四、菌落总数的检验方法 （4）注意事项 ③注意每递增稀释一次，必须另换1支1mL灭菌吸管；吸管在进出装有稀释液的玻璃瓶或试管时，不要触及瓶口或试管的外侧部分；当用吸管将检样稀释液加至另一装有9mL空白稀释液的管内时，应小心沿管壁加入。 四、菌落总数的检验方法 （4）注意事项 ④在检液加入平皿后，应在20min内倾入琼脂，并立即使之与琼脂混合均匀。皿内琼脂凝固后，将平皿倒置于培养箱进行培养 。 四、菌落总数的检验方法 （4）注意事项 ⑤在取样进行检验的同时，于操作台上打开一块琼脂平板，其暴露的时间应与该检样从制备、稀释到加入平皿时所暴露的时间相当，然后与加有检样的平皿一起培养。 四、菌落总数的检验方法 （4）注意事项 ⑥培养温度一般为37℃，培养时间为48h左右。 ⑦加入平皿内的检样稀释液，有时带有检样颗粒，在这种情况下，为了避免与细菌菌落发生混淆，可做一检样稀释液与琼脂混合的平皿，不经培养，于4℃环境中放置，以便在计数检样菌落时用作对照。 四、菌落总数的检验方法 （4）注意事项 ⑧检样如为微生物类制剂，则平板计数中应相应地将有关微生物排除，不可并入检样的菌落总数中做报告。 ⑨平板活菌计数法只能检出生长的活菌，不能检出样品中全部的细菌数。 ⑩矿泉水和自来水等的检测，一般不稀释，直接取样进行琼脂平板培养。 五、细菌菌落总数测定的其他方法 1、平板表面涂布法 将营养琼脂制成平板，经50℃，1~2h或35℃，18～20h干燥后，于其上滴加检样稀释液0.2mL，用L形棒涂布于整个平板表面，放置约10min，倒 置 培 养 于(36±1)℃温箱内培养(48士2)h。 五、细菌菌落总数测定的其他方法 1、平板表面涂布法 优点：此法优于倾注法，因菌落生长于表面，便于识别和检查其形态。 缺点：取样量较倾注法少，代表性将受到一定影响。 五、细菌菌落总数测定的其他方法 2、平板表面点滴法 与涂布法相似。所不同者，只是用标定好的微量吸管或注射器针头按滴将检样稀释液滴加于琼脂平板固定的区域，每个区域滴l滴，每个稀释度滴2个区域。滴加后，将平板平置约5~10min， 然后倒置培养。 五、细菌菌落总数测定的其他方法 2、平板表面点滴法 优点：快速，节省人力物力，适于基层