真核表达质粒EX-Y2069-M29构建并检测LRP16蛋白在人子宫内膜癌HEC-1-B细胞中表达.pdf

j。一“ 量叠 ＼1删炒≤ 在人子宫内膜癌HEC-1-B细胞中的表达 摘 要 HEC．1．B 染人子宫内膜癌HEC．1．B细胞，建立稳定表达L RPl6蛋白 的细胞株，并检测LRPl6蛋白在人子宫内膜癌HEC．1．B细胞中的表 细胞，并用Westernblot免疫印迹法检测在人子宫内膜癌HEC．1．B细 没有发生明显的降解，说明总获得的RNA和mRNA完整。PCR扩增 后的产物在约980bp处出现明显的特异性条带，与理论预计的cDNA 建，重组质粒EX．Y2069．M29经酶切和测序鉴定，表明均含有大小正 确的LRPl6基因片段。3、Westernblot免疫印迹法检测在人子宫内膜 LI冲16蛋白相对表达量比较，差异无统计学意义(P0．05)； - 6 基因片段被成功插入真核表达载体EX．Y2069．M29质粒的多克隆位 细胞后，可在HEC．1．B细胞中稳定表达，为进一步研究LRPl6基因 奠定了基础。 关键词：LRPl6基因；真核表达质粒；HEC．1．B细胞；基因表达 To Constructthe Plasmid EukaryoticExpression andtestthe ofLRPl6 expression gene ofLRP16 Abstract：Objective：Constructiongeneeukaryotic EX—Y2069一M29．wastransfectedintohuman expressionplasmid endometrialcarcinomaHEC-1-Bstablecellline of cells，a expression LRP16 detectionofLRP16 inhumanendometrial protein，and gene carcinomaHEC-1-B LRP16 was cells．Methods：Full-length fragment chain subclonedintothe amplifiedbypolymerase reaction(PCR)，was eukaryotic vector toconstructrecombinant expressionpReceiver-M29 plasmid nucleotide andDNA EX—Y2069-M29．Analysissequence confirmedthattherecombinantEX·-Y2069··M29 sequencing plasmid inse