肠道病毒71型VP1基因和5’非编码区核酸序列的分析.pdf

摘要 摘要 肠道病毒71型(Enterovirus andmouth disease，m?MD)暴发流行的主要病原体之一，它还能够引起无菌性 脑膜炎、神经源性肺水肿等与神经系统相关的疾病，致残及病死率较高。2008 年春夏之际，我国部分省区(市)出现了EV71引起的手足口病的严重疫情，重 症和死亡病例不断出现。2008年5月卫生部将手足口病纳入丙类传染病进行管 员，VPl是其主要的中和决定因子，能够直接决定其抗原性，具有与肠道病毒 血清型完全对应的遗传多样性。EV71的5’非编码区(Untranslated region，UTR) ribosome 含有一个I型的内部核糖体进入位点(Internal site，IRES)和其 entry 它结构，在病毒复制和翻译起始过程中发挥重要的作用，对脊髓灰质炎病毒的 研究发现5UTR涉及病毒毒力。 对不同临床背景的EV71毒株的VPl和5UTR核酸序列的测定和分析，有 EV71的亚型的监测和防控策略的制定有较大的意义；目前有关EV71的研究中， 区中的准确位置，可以为研究IRES的功能提供更加精确的位点。 目的 1．比较不同临床结局EV7l毒株VPl和5UTR的核酸序列。 2．确定研究中Ev71毒株的型别。 3．比较不同临床结局EV71毒株5UTR的RNA二级结构。 4．确定EV71内部核糖体进入位点(Ⅱ也S)5’及3’端分界。 方法 1．标本来源：粪便标本采集自2010年3月至5月间在郑州市第六人民医院 住院的手足口病患儿。 2．病毒核酸提取：提取标本处理液中的病毒RNA。 分别用VII和5UTR特异性引物对VPI和5’UTR进行扩增。 I 摘要 5．5UTR的克隆与鉴定：经过凝胶提取和纯化，将所得的5UTR片段与载 体进行连接，转化入感受态细胞中，筛选阳性克隆，增菌培养后提取质粒，以 5UTR特异性引物对提取的质粒进行PCR检测。 6．分析比较VPl和5UTR序列，构建系统进化树：将不同临床结局EV71 统进化树。 7．5urR的RNA二级结构预测：用RNAdraw1．1来预测5UTR的RNA二 级结构。 结果 1．获得了EV7lVPl和5UTR完整的核苷酸序列。 上，重症组和轻症组毒株间VPl序列的一致率在97．8*／o,-,100％之间。11个毒株 序列(743bp)间的一致率均在96．9％以上，重症组和轻症组毒株间5UTR序列 的一致率在96．9％--99．0％之间。 3．2010年郑州EV71毒株的VPl核酸序列与C4a亚型毒株的平均一致率为 97．4％，属于C4a亚型。根据5UTR核苷酸序列的系统进化分析结果与根据VP1 核苷酸序列的结果一致。 4．重症以及死亡毒株的5UTRRNA二级结构比轻症毒株的二级结构复杂 和紧凑。 5．确定EV715UTR的IRES定位于第101-592核苷酸之间的区域。 结论 列完全一致，未发现重症和死亡毒株特异性的差异位点。 2．研究中的11个EV71毒株均属于C4a亚型。 3．根据EV715UTR分型的结果与根据VPl核酸序列分型的结果一致。 4．Ev71 5UTR的内部核糖体进入位点定位于第101-592核苷酸之间的区域。 关键词手足口病肠道病毒7l型VPl5’非编码区内部核糖体进入位点 Abstract Abstract Enterovirus7 the causeof andmouth 1(Ev71)ismajor Hand,foot disease(HFMD) inchildren．EV7l