细胞培养常用设备及实验技巧.pdf

常用设备 准备室的设备： 单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储 品规（放置消毒过的物品）、包装台。 配液室的设备： 扭力天平和电子天平（称量药品）、PH 计（测量培养用液PH 值）、磁力搅拌器（配置溶液 室搅拌溶液）。 - B3 S$ l M7 b6 q, ?, e- L! m 培养室的设备： 1 H# Q5 Y! C6 e 液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱（-80℃）、空 调、二氧化碳缸瓶、边台（书写实验记录）。必须放在无菌间的设备：离心机（收集细胞）、 超净工作台、倒置显微镜、CO2 孵箱（孵育培养物）、水浴锅、三氧消毒杀菌机、4 ℃冰箱 （放置serum 和培养用液）。 无菌操作 无菌室的灭菌： 1.定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等，然后用3‰ 来苏尔或者新洁尔灭或者0.5 ％过氧乙酸擦拭。 2.CO2 孵箱（培养箱）灭菌：先用3‰新洁尔灭擦拭，然后用75 ％酒精擦拭或者0.5 ％过氧 乙酸，再用紫外灯照射 3.实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20-30 分钟 ) b* R/ y3 K0 L. K* v! X9 {# s5 V 4.实验后灭菌：用75 ％酒精（3‰新洁尔灭）擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。 实验人员的无菌准备： 1.肥皂洗手。 7 w R# u3 s8 |5 | ~2 k 2.穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋 4 U* z; @8 p t5 n Q 3.用75 ％酒精棉球擦净双手。 无菌操作的演示： 1.凡是带入超净工作台内的酒精、PBS 、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用75 ％酒精擦拭瓶子 的外表面 * I6 b U @7 T. l P, x% p 2.靠近酒精灯火焰操作。 \. U2 U! b2 H [: U) w8 o k. | 3.器皿使用前必须过火灭菌 \; N, c1 W* l6 N w1 q8 {9 t 4.继续使用的器皿（如瓶盖、滴管）要放在高处，使用时仍要过火。 2 `/ `8 x% q% T5 \5 C 5.各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。如吸管不能碰到废液缸。 k8 ^2 @# q S1 k( H o( m d2 l$ @ 6.吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管，防止交叉污染。 A1 Y- ~# ]# {; N 器械的清洗和消毒 , v+ s4 a M1 } c 玻璃器械洗消： 一、新的玻璃器皿的洗消： . b5 x. O! J- i+ c2 R, W( V W! r 1. 自来水刷洗，除去灰尘。) v! D1 |2 \5 u7 C/ x 2.烘干、泡盐酸：烤箱中烘干，然后再浸入5 ％稀盐酸中12 小时以除去脏物、铅、砷等物。 3.刷洗、烘干：12 小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干。, h8 | ` ` g9 B 4.泡酸、清洗：用清洁液（重铬酸钾120g：浓硫酸200ml ：蒸馏水1000ml）浸泡12 小时， 然后从酸缸内捞出器皿用自来水冲洗15 次，最后蒸馏水冲洗3-5 次和用双蒸水过3 次。 * u, r! O* n L; ~6 n- y4 X 5.烘干、包装：洗干净后先烘干，然后用牛皮纸（油光纸）包装。 $ C% V6 X4 f* X. p) }* u( H 6.高压消毒：包装好的器皿装入高压锅内盖好盖子，打开开关和安全阀，当蒸气成直线上升 时，关闭安全阀，当指针指向15 磅时，维持20-30 分钟。 , o1 x# q P T7 d e( n r 7.高压消毒后烘干 2 s$ Z9 A6 h% g m! ?$ h 二、旧的玻璃器皿的洗消： 1．刷洗、烘干：使用过的玻璃器皿可直接泡入来苏尔液或洗涤剂溶液中，泡过来苏尔溶液 （洗涤剂）的器皿要用清水刷洗干净，然后烘干。 2.泡酸、清洗：烘干后泡入清洁液（酸液），12 小时后从酸缸内捞出器皿立即用自来水冲洗 （避免蛋白质干涸后粘附于玻璃上难以清洗），再用蒸馏水冲洗3 次。 3.烘干、包装：洗干净的器皿烘干后取出用牛皮纸（油光纸）等包装，以便于消毒储存及防 止灰尘和再次被污染。 4.高压消毒：包装好的器皿装入高压锅内，盖好盖子，打开开关和安全阀，随着温度的上升 安全阀冒出蒸气，当蒸气成直线冒出3-5 分钟后，关闭安全阀，气压表指数随之上升，当指 针指向15 磅时，调节电开关维持20-30 分钟即可。（玻璃培养瓶消毒前可将胶帽轻轻盖上）c0