Achaetomiumsp.Xz8甘露聚糖酶在毕赤酵母中的表达及其酶学性质分析.pdfVIP

核 农 学 报　 ２０１５，２９（１）：００８７ ～００９４ ８７ 　 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＮｕｃｌｅａｒＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ 文章编号：１０００⁃８５５１（２０１５）０１⁃００８７⁃０８ Ａｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ ｓｐ． Ｘｚ８甘露聚糖酶在毕赤酵母中的 表达及其酶学性质分析 １，２ ３ ３ ３ ２ １ 李文革 　 石鹏君 　 卢海强　 姚　 斌　 张祺玲　 戴良英 １ ２ （ 湖南农业大学，湖南 长沙　 ４１０１２８； 湖南省农业科学院，湖南 长沙　 ４１０１２５； ３ 中国农业科学院饲料研究所，北京　 １００８１） 摘　 要：甘露聚糖酶作为最主要的半纤维素酶类现已被广泛地应用在饲料、造纸、洗涤剂、食品及石油开 采等领域。 本研究从高温真菌Ａｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ ｓｐ． Ｘｚ８ 菌株中利用兼并引物和 Ｔｈｅｒｍａｌ ａｓｙｍｍｅｔｒｉｃ ｉｎｔｅｒｌａｃｅｄ ＰＣＲ（Ｔａｉｌ⁃ＰＣＲ）的方法克隆获得一个新的糖苷水解酶５ 家族的甘露聚糖酶基因（ｍａｎ５Ｘｚ８）。 基因全长１２３９ｂｐ，序列分析发现其编码４１２ 个氨基酸和１个终止密码子，预测的信号肽序列为Ｎ 端的 ２０ 个氨基酸。 将成熟蛋白序列克隆到毕赤酵母分泌型表达载体ｐＰＩＣ９ 中，利用甲醇诱导重组酵母菌表 达目的蛋白，经ＳＤＳ⁃ＰＡＧＥ 电泳分析，表达蛋白分子量约５５０ ｋＤａ。 对其酶学性质进行测定，Ｍａｎ５Ｘｚ８ 的最适ｐＨ值为５０，在ｐＨ值９０ 可以保持４０％以上的酶活性，在ｐＨ值５０～９０具有良好的ｐＨ稳定 性。 最适作用温度为５０℃，并对ＳＤＳ具有较高的耐受性。 以角豆胶为底物，Ｍａｎ５Ｘｚ８ 的比活、Ｋ 及 Ｖ ｍ ｍａｘ －１ －１ －１ －１ 值分别为１０１６ Ｕ·ｍｇ 、４４ ｍｇ·ｍＬ 、１２８２ μｍｏｌ·ｍｉｎ ·ｍｇ 。 因此，Ｍａｎ５Ｘｚ８ 为后期研究甘露聚糖 酶的工业应用和酸碱催化机制提供了良好的材料。 关键词：Ａｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ ｓｐ． Ｘｚ８；甘露聚糖酶；克隆；毕赤酵母；酶学性质 ＤＯＩ：１０１１８６９／ ｊ．ｉｓｓｎ．１００⁃８５５１２０１５０１．００８７ 　 　 植物细胞壁主要组成成分为纤维素，半纤维素以 用，例如甘露聚糖酶，甘露糖苷酶，半乳糖苷酶和脱乙 ［１］ ［６］ 及木质素，它们在其中的比例大约是２∶１∶１ 。 因此， 酰酶等 。 其中 β⁃１，４⁃甘露聚糖酶（ｍａｎｎａｎａｓｅ，ＥＣ 纤维素是植物细胞壁中最主要的组成成分，而半纤维 ３２１７８）是最主要的切割甘露聚糖主链的糖苷水解 ［７］ 素的丰富程度仅次于纤维素，这２ 者是自然界中最主 酶 。 甘露聚糖酶在植物、软体动物和微生物中被广 要的能源物质。 半纤维素主要是由多种通过β⁃１，４⁃糖 泛发现，其中以微生物来源的甘露聚糖酶的种类最