肝细胞移植联合养肝合剂”对兔血吸虫肝硬化治疗效果研究.pdfVIP

中文摘要 目的： 制备大白兔血吸虫肝硬化动物模型。运用生化检测和病理检查来证 实模型的可靠性和稳定性。通过制备的动物模型作肝细胞移植实验并联合 养肝合剂的疗效观察肝硬化兔切除右叶制备的肝细胞悬液能否在自体腹 腔内长期生存并发挥作用；观察中药养肝合剂能否加强移植肝细胞的存活 及其发挥生理功能；观察中药“养肝合剂竹能否有利于从肝硬化组织分离 出的肝细胞在体外生长增殖，为临床上治疗肝硬化提供一个全新的思路。 开创一种肝硬化，尤其是血吸虫肝硬化疗效显著的新治疗方法， 探索血 吸虫肝硬化中西医结合治疗的新结合点，新途径。 方法： 在湖北省疾病预防控制中心购成年日本纯种大白兔6O只，在湖北 省疾病控制中心血吸虫病防治研究所给每只大白兔接种日本血吸虫尾蚴 180±1 0条，饲养2～3个月后，肝组织活检证实肝硬化已形成后，按60 mg／kg体重使用吡喹酮，杀灭体内全部血吸虫以终止病情进一步发展。随 机分为3组，每组20只，分别为肝细胞移植组，肝细胞移植联合中药“养 肝合剂组，肝叶切除不移植肝细胞组。①肝细胞移植组： 切除肝左叶， 分离制备肝细胞悬液，移植到自体腹腔。②肝细胞移植联合中药“养肝合 剂骨组：切除肝左叶，分离制备肝细胞悬液，一部分在co：孵化箱培养， 并在培养液中加入20％的含中药血清，观察对肝细胞贴壁、生长、繁殖的 影响，大部分肝细胞悬液种植自体腹腔，术后每日灌胃中药“养肝合剂”。 ③肝叶切除但不移植肝细胞组(对照)术后观察3月以上，移植前及移植 后每月抽血查肝功能、凝血酶原时间、血氨。④观察结束后，观察肝脏及 腹膜，腹膜组织切片病检，了解腹膜上有无肝细胞再生结节。肝脏病理检 了解肝硬化程度。 结果： 1．实验成功制备血吸虫性肝硬化模型 生化指标显示肝脏功能有肝 脏损伤的趋势，肉眼均可以发现都肝脏表面凹凸不平，肝切面散在许多 岛状灰白色结节，肝脏质地变硬；做病理切片证实形成干线型纤维化。 2． 兔血吸虫肝硬化自体肝细胞移植效果较好 细胞移植能够改善兔 血吸虫肝硬化的肝脏功能并延长其生存时间，“养肝合剂丹能够加速移植 的肝细胞在腹部的贴壁，缩短发挥作用的时间，提高肝硬化兔的存活率。 3．养肝合剂能促进从肝硬化组织里分离出来的肝细胞的贴壁。对比未 加药物血清的肝细胞培养瓶，有显著性差异(PO．01)。 结论： 本研究证实血吸虫肝硬化动物模型是个比较理想的科学模型，既符合 血吸虫肝硬化病发展的一般规律，有符合临床病理的特点，适合作为治疗 血吸虫肝硬化或者其他疾病引起的肝硬化的稳定而且可靠动物模型。在血 吸虫肝硬化细胞移植的动物实验中，我们成功的分离到肝硬化肝脏的细胞 悬液，同时也证实肝细胞移植能够改善兔血吸虫肝硬化的肝脏功能并延长 其生存时间，“养肝合剂”能够加速移植的肝细胞在腹部的附壁生长，尽 快发挥作用，提高肝硬化兔的存活率。总之，通过实验我们发现：①肝细 胞移植组兔在大多在恢复生理功能，生化指标、存活率明显优于对照组， 肝细胞移植组联合“养肝合剂”组的生活指标、存活率又明显优于移植组 和对照组。②“养肝合剂”制备的药物血清能够促进体外培养的肝细胞的 存活和贴壁。③血吸虫肝硬化动物模型成模率高，模型稳定，是研究肝硬 化疾病的一个比较理想的模型。 关键词： 肝硬化； 动物模型； 细胞移植； 养肝合剂 Ⅱ Abstract objectives useofchemical modeloflivercirrhosisSchistosoma．The ofrabbitanimal Preparation examinationtoconfirmthe and and detectionand reliability biological pathological ofthe the