植物组培实验报告解析.docVIP

植物组织培养实验报告 实验名称： 葡萄柚的扩繁组织培养 学 院： 园林学院 专 业： 2012级园林 小组成员： 指导老师： 实验日期： 2014.9.1—2014.10.14  实验一：葡萄柚扩繁培养基的制备（1L) 实验时间：9月1日 实验地点:西南林业大学六楼实验室 实验步骤： 1．量取液体。大量元素100 ml（ 用100 ml的量筒量），微量元素、有机元素、铁盐均10 ml（用10ml的量筒量），将上述量取的溶液混合于1L大烧杯中。 加纯水至500-600 ml刻度线稀释。 称取蔗糖30 g，用玻璃棒搅拌至溶解。 定容。用1000 ml量杯定容后转移至大烧杯 用移液枪取6-BA100μml,IBA 40μml。 混匀，调PH至5.9。 称取琼脂7g于塑料盆内。将调好PH的培养基倒入塑料盆， 置于微波炉内煮14min。 8．分装，封口，标记。 9. 121℃高温灭菌20min。 1000ml约一共分装33个瓶，加上实验老师给予的3个培养基我们组一共有36个瓶。 实验二：葡萄柚组培接种工作 实验时间：9月3日 实验地点：西南林业大学A栋六楼接种实验室 实验过程： 准备材料及器材：葡萄柚脱毒苗、超净工作台，手套、剪刀（3把）、镊子（3把）、酒精灯两盏、无菌皿。 实验步骤： 1.接种前准备工作： 用酒精棉球将超净工作台台面擦拭一遍，然后将所需物品放入超净工作台内。 2.接种操作： ⑴将超净台的门打开至1/3，带上手套，用酒精将双手进行消毒，反复揉搓双手使手上酒精挥发完全，将手伸入超净台内。 ⑵点燃酒精灯。点燃前要确保手上的酒精已完全挥发，否则容易造成危险 打开无菌皿。 ⑶镊子消毒。先用手将报纸打开，后在酒精灯上灼烧（除手捏的地方不烧，其余的均要烧，烧到烫为止。镊子用完都要放到特定放镊子的架子中，且每次用时均要灼烧消毒）。 ⑷挑拣材料。先将盛放葡萄柚脱毒苗的瓶子上的塑料膜取下。拿取镊子和剪刀（注意取放剪刀与镊子时要绕过培养基的瓶口，防止污染）。用镊子将所需脱毒苗从玻璃瓶中夹到无菌皿上。用剪刀及镊子小心的将脱毒苗的分支分开，将较高大的苗剪短。放在培养皿上备用。 ⑸接种：先将培养瓶的瓶口打开（拎着密封膜两角将密封膜揭起，将其朝向外面的一面向下置于工作台上）。将培养瓶斜拿，在酒精灯前稍灼烧瓶口，后用镊子夹住葡萄柚插入培养瓶中（注意芽朝上，以免插倒），后将盖子密封膜盖上并用皮筋扎紧密封。整个接种过程要尽量在离酒精灯十厘米内的地方进行，防止污染。 ⑹清理台面。把用过的废弃物及不用的东西拿出超净台，将台面用酒精擦净。关上超净台的门。 3.做记录： 在培养瓶上标上葡萄柚首字母大写，日期及编号，以便日后观察记录。 备注： 因小组成员有六名，所以是两个人同时进行的接种操作。每人接种5~7瓶，上一人接种完成后，将剪刀、镊子用酒精灯灼烧消毒，放置于专用架子上。下一人进行操作时，用的是之前已灼烧消毒并已冷却的剪刀与镊子，而不是上一人刚消好毒还有些灼热的剪刀与镊子。 接种实验过程图片如下： 9月3日，小组成员在认真的进行接种观察记录： 本小组一共有6人，编序号后进行培养基的接种，后续观察结果如下。 编号 1组 2组 3组 4组 5组 6组 总 瓶数 7 5 7 5 7 5 36 污染瓶数 2 2 0 1 0 3 8 未污染数 5 3 7 4 7 2 28 污染率 28.6% 40% 0 20% 0 60% 22.2% （注：组别不代表实验操作顺序） 由表中数据可以看出，个别成员组的污染率达到60%，较为严重。整体的污染率为22.2%。经回顾总结，本组导致污染的原因可能有以下几种（因外植体是由实验室提供，故暂不考虑外植体自带的污染）： 培养基污染:因无白色云雾状物且出现在培养基内部，所以说明并不是培养基在灭菌过程中时间不够或气压不够所致的灭菌不彻底导致的污染，而有可能是由于扎口不紧或放置培养基的地方空气环境不洁净所致. 操作过程中的污染：包括实验器皿消毒不彻底、接种人员对自身消毒不严或未熟练掌握无菌操作的各个技术环节，造成组培苗污染。实验器皿污染主要是部分操作时镊子与剪刀放置不当，或用酒精灯灼烧灭菌时灼烧时间过短造成。 因本组是两人同时操作，故增加了空气流动性，也可能会造成污染。 现将不同时间节点的葡萄柚组培苗图片归纳如下： 9月11日，组培苗无明显变化，部分形成愈伤组织。 9月16日，可清晰地看到愈伤组织，部分已分化出芽。同时有一瓶已被污染。