W免疫学常用实验方法.ppt

* 密度梯度离心法:在人骨髓或脐带血中，单个核细胞包括干细胞，淋巴细胞和单核细胞，一般认为，干细胞在形态上为淋巴样细胞，其密度与淋巴及单个核细胞的密度基本相同。 单抗贴壁铺展法:利用抗原抗体结合，在培养板上用抗体包被 上述方法适用于造血细胞，实体组织的干细胞分离需要在组织消化的基础上进行。 * 步骤2的处理时使MEF失去增殖能力单细胞克隆 * 设门分析 可以通过设“门” (Gate)，分析、分选感兴趣的细胞。 实验对照的设计 阴性对照：常用同型抗体对照 阳性对照：单阳性对照（多色分析时用于仪器校正） 抗体的选择 首选直标抗体 荧光分子 实验标本的处理 单细胞悬液的制备 抗体浓度 非特异结合的去除：洗涤和封闭 4. Western Blott 5. Hybridoma Technique Monoclonal Antibody Preparation Jerme，K?hler and Milstein 1984 Nobel Prize B cell Myeloma Secrete Ab Clonal A clonal cell line secreting specific Ab ? B cell Myeloma Fusion B cell B cell+