_第六章基因的转移与重组体的筛选和鉴定.ppt

作业 1 农杆菌介导的转化方法的原理及优点。 2 基因枪法的一般步骤。 此法的基本原理是，将包裹着DNA的金粒或钨粒，通过基因枪(gunpowder)、氦气 (helium gas)或电击(electric discharge)等技术来获得足够的加速度，射入完整的植株、组织外植体(tissue explants)、愈伤组织或细胞悬液。 生物弹击法的操作对象可以是完整的细胞或组织，突破了基因转移的物种界限，也不必制备原生质体，实验步骤比较简单易行，具有相当广泛的应用范围，已经成为研究植物细胞转化和培养转基因植物的最有效的手段之一 * * 第六章　基因的转移与重组体的　　　　筛选和鉴定 一、粘性末端的连接 DNA连接酶把相互靠近的5’端磷酸与3’-OH连到一起 单酶切、双酶切 第一节 DNA的体外重组 DNA的体外重组：将目的基因与载体连接，这种重新组合的DNA称为重组DNA。 （一） 直接连接 T4 DNA连接酶虽然能连接平末端，但效率很低，只有粘性末端的1~10%。 5’ 5’ 5’ 5’ 3’ 3’ 3’ 3’ -OH -OH -P -P P- P- HO- HO- 5’ 3’ -OH -P P- HO- 5’ 3’ 二、平末端（blunt end）的连接 （1）同聚加尾法 （二） 人工加尾形成 “粘性末端” DNA末端转移酶能在没