实验课-分子荧光光谱法实验报告.docVIP

实验二 分子荧光光谱法 [实验目的] 1、掌握荧光光度计的基本原理及使用。 2、了解荧光分光光度计的构造和各组成部分的作用； 3、掌握分子荧光光度计分析物质的特征荧光光谱：激发光谱、发射光谱的测定方法。 [实验原理] 1、激发光谱与发射光谱 具有不饱和基团的基态分子经光照后，价电子跃迁产生荧光，是当电子从第一激发单重态的最低振动能级回到基态各振动能级所产生的光辐射。 激发光谱：是指发光的某一谱线或谱带的强度随激发光波长（或频率）变化的曲线。横坐标为激发光波长，纵坐标为发光相对强度。激发光谱反映不同波长的光激发材料产生发光的效果。即表示发光的某一谱线或谱带可以被什么波长的光激发、激发的本领是高还是低；也表示用不同波长的光激发材料时，使材料发出某一波长光的效率。 荧光为光致发光，合适的激发光波长需根据激发光谱确定——激发光谱是在固定荧光波长下，测量荧光体的荧光强度随激发波长变化的光谱；获得方法：先把第二单色器的波长固定，使测定的不变，改变第一单色器波长，让不同波长的光照在荧光物质上，测定它的荧光强度，以为纵坐标，为横坐标所得图谱即荧光物质的激发光谱， ，实际上选波长较长的高波长峰。 发射光谱：是指发光的能量按波长或频率的分布。通常实验测量的是发光的相对能量。发射光谱中，横坐标为波长（或频率），纵坐标为发光相对强度。发射光谱常分为带谱和线谱，有时也会出现既有带谱、又有线谱的情况。发