氡α粒子照射致支气管细胞线粒体损伤及RNA表达改变.pdfVIP

氡/α粒子照射致肺支气管细胞线粒体损伤及RNA 表达改变 中文摘要 中文摘要 目的： 氡 （Rn ）是除吸烟外致人类肺癌的第二大危险因素。氡及其子体对健康的主 要危害在于其发射的高能量 α 粒子，吸入体内后可对支气管和肺细胞形成高 LET 照射。线粒体DNA （mtDNA ）是致癌物作用的重要靶点。本课题在动物和细胞水 平上，研究氡染毒和 α 粒子照射对肺组织和支气管上皮细胞的损伤效应，在建立 - 人支气管上皮细胞线粒体DNA 敲除模型 （ρ BEAS-2B ）的基础上，观察照射后细 + - 胞转化过程中线粒体结构和功能的改变，同时采用高通量芯片技术，筛选ρ 与 ρ 细胞间以及α 粒子照射前后差异表达的mRNA 和微小RNA （miRNA ），为探讨线 粒体在氡致细胞恶性转化中的作用机制提供实验依据。 方法： Wistar 大鼠置于多功能生态氡室慢性吸入染毒，累积染毒剂量达 100、200 、 400 工作水平月 （Working level month, WLM ）。对细胞进行氡染毒和α 粒子照射， 3 氡暴露浓度为20000Bq/m ，染毒时间20min/次，染毒3d 后重复1 次，连续染毒2 次后作为染毒第1 代 （Rn1 ），分别染氡10 代 （Rn10 ）和30 代 （Rn30 ）。α 粒子照 射剂量为0.1、0.25、0.5 和 1.0Gy，分二次和四次照射。采用EB 法建立人永生化 - 0 支气管上皮细胞（BEAS-2B ）线粒体DNA 部分和完全敲除模型（ρ , ρ ）。Real-time PCR 检测线粒体DNA 拷贝数变化，流式细胞仪法检测线粒体膜电位、细胞内活性 氧 （ROS ）水平和细胞周期的改变。通过血清抗性、细胞增殖活性、细胞锚着独 立生长和Transwell 膜侵袭试验观察细胞的转化情况。采用NimbleGen-135K mRNA 表达谱芯片和miRCURYTM 芯片筛选差异表达的mRNA 和miRNA，并用实时荧 光定量PCR 进行验证。 结果： 大鼠氡染毒后，肺组织氧化损伤明显，8-OHdG 和线粒体拷贝数随染毒剂量的 增加而增加，T-AOC 含量则随染毒剂量的增加而降低。与细胞周期相关的基因P53， RB1 ，MDM2 ，MDM4 ，CDK2 和CDK4 等的表达均降低。成功建立了BEAS-2B - 细胞线粒体DNA 敲除 （ρ ）及α 粒子照射的细胞模型。经照射传代，细胞获得锚 I 中文摘要 氡/α粒子照射致肺支气管细胞线粒体损伤及RNA 表达改变 着独立生长和侵袭能力，逐渐出现恶性转化的趋势。α 粒子照射后细胞线粒体膜电 位升高，ROS 含量增多，线粒体拷贝数增加。细胞周期进程中 G1、G2 期细胞减 少，S 期细胞增多，细胞的分裂增殖加快。细胞受到α 粒子照射后，在细胞周期相 关的基因中，CDK2 和CDK4 表达上调，提示G1 向S 期的进程被加速，同时P53 、 RB 1、MDM2 和MDM4 的表达也都上调，其对细胞周期的调控作用被激活。该结 果与体外氡染毒细胞的结果相同，从而证实氡对细胞的毒作用是通过氡及子体的 衰变产物发射的 α 粒子所引起。mRNA 表达谱的分析结果显示，α 粒子照射后， + ρ -P40 细胞中表达上调的基因主要与细胞粘附，细胞凋亡和细胞分化等功能相关； 表达下调基因与蛋白质翻译，负调控转录因子活性，免疫应答和 G 蛋白信号通路 等功能有关。上调的基因主要涉及与 MAPK、粘附分子、氨基酸代谢、胰岛素代 谢和WNT 等信号通路的激活，以及TGF-β、嘌呤代谢、膀胱癌和小细胞肺癌等信 -