L液相色谱常见问题分析课件.ppt

色谱问题的可能根源 流动相 进样器 在线过滤器 色谱柱 检测器 样品 泵 保护柱 连接管线及接头 软件 其它偶然因素 解决色谱问题的策略 色谱柱 保护柱 流动相 样品/样品瓶问题 泵 进样器 检测器 数据采集 谱带展宽/连接 HPLC实验中常见问题分类 HPLC系统压力问题 压力高 压力低或没有压力 压力不稳 流路基线噪音问题 基线不稳定(不重复) 长、短程振荡 基线漂移 噪音脉冲尖刺 压强单位换算 HPLC系统压力问题分析(1) 问题:系统压力高 可能的原因: 温度太低 流速太高 流动相粘度大 管路堵塞 仪器或色谱柱堵塞 压力传感器问题 HPLC系统压力问题分析(2) 问题:压力低或没有压力 可能原因: 温度太高;流速太低 泵关闭或保险丝断了 泵未输送流动相 系统内有渗漏处 所用溶剂不正确 HPLC系统压力问题分析(2) 问题:压力低或没有压力 可能原因:（续） 储液瓶中无溶剂 低压限设置不当 泵未正确排气 溶剂入口过滤头堵 入口管路中有空气 泵失效 问题:压力不稳 可能原因: 压力传感器问题 泵排气不充分 泵失效 流动相未正确脱气 所用溶剂不混溶或易挥发 HPLC流路基线噪音问题分析 基线不稳定(不重复) 检测池中有大的气泡 流路中有小气泡流过 系统未稳定或未达到化学平衡 流动相被污染 检测器流动池漏 色谱柱污染 HPLC流路基线噪音问题分析 基线漂移 系统不稳或未化学平衡 温度波动 流动相未正确脱气 流动相被污染;流动相中有稳定剂或稳定剂变化 检测器流动池漏;系统中有渗漏 色谱柱污染;固定相渗漏 选用不正确的检测波长(相对于溶剂) 有迟流出的组分 HPLC流路基线噪音问题分析 短程振荡 泵压不稳 泵入口管松,弯或堵塞 溶剂混合不充分 检测池中有大气泡 泵入口阀脏或失效 泵柱塞杆密封垫磨损 检测器出口溶液成滴状流入废液瓶 HPLC流路基线噪音问题分析 长程振荡 温度波动 溶剂被循环通过系统 噪音脉冲尖刺 流路中有小气泡 泵头有气泡空腔 入口阀脏或失效 检测池中有小颗粒物 泵或检测器未正确接地 无规律基线噪音 气泡-流动相脱气 气体滞留在检测器中 流动相脱气 对检测池加一定的反压 泄漏-修复泄漏，更换接头 混合问题-增加系统体积 管线阻塞 疏通管线，冲洗系统 电问题 改变电路，去除根源 有规律的基线噪音 几乎都由色谱泵引起 泵头中有气泡 – 做泵排气并重做溶剂脱气 单向阀脏或失效- 清洗或更换之 柱塞杆密封垫漏液 - 更换 柱塞杆损坏 - 更换 混合问题- 增加系统体积 电噪音 - 改变电路，去除根源 色谱图常见问题分类 色谱图常见问题主要有三类: 色谱峰峰形异常问题 例如负峰,宽峰,肩峰,双峰,峰形不对称等 色谱图中多峰少峰问题 色谱图未出峰,出峰比预想的多等 色谱峰保留时间问题 保留时间不稳定等 HPLC最常见的问题 表明目前状况并未得到最佳的色谱柱性能 变形的色谱峰会导致: 积分不准 分离度不佳 灵敏度下降 色谱图峰形问题示例 色谱峰形问题的来源 色谱柱毁坏 溶解样品的溶剂不当 第二种相互作用 色谱柱过载 质量过载 体积过载 其它柱外效应 管路连接 采样速率 时间常数 色谱峰形欠佳的其它原因 色谱峰形问题：展宽且拖尾的色谱峰 色谱柱进口过滤器(筛板)部分阻塞 卸下接头 在线过滤器污染 更换筛板 保护柱污染 更换保护柱或柱芯 部分色谱峰形不正常 碱性物质峰拖尾 拖尾是由什么引起的? 混合型保留机理-第二种相互作用 与键合相的疏水作用 与硅胶带电点的离子交换作用 缓冲液的 pH与拖尾 色谱峰形异常问题分析(1) 所有的峰均为负峰: 信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒 光学装置尚未达到平衡 一个或几个峰是负峰 流动相吸收本底高 进样过程中进了空气 离子对分离中的系统峰 样品组分的吸收(RI或UV)低于流动相 色谱峰形异常问题分析(2) 所有的峰都是宽峰 系统未平衡或未达到化学平衡 溶样的溶剂比流动相强很多 色谱柱类型或尺寸不正确 色谱柱或保护柱被污染或降级 温度变化对色谱柱的影响 色谱峰形异常问题分析(3) 较早洗脱的峰呈宽峰 进样体积过大或样品浓度太高 进样器有问题,定量环(Loop)大小不合适 在线过滤器,保护柱,色谱柱或管路堵塞 管路问题:内径不对或切管不正确 管路连接问题:接头或锥箍不正确 检测器时间常数不正确 峰展宽/浓度(质量)过载 进样体积对色谱峰形的影响 峰展宽/体积过载 峰展宽/体积过载 峰展宽/柱外谱带展宽 峰展宽实例:管线内径对柱效的影响 色谱峰形异常问题分析(4) 色谱峰峰形异常问题: 峰比预想的要小 样品粘度过大 进样器有问题或进样体积有误 检测器设置不正确,定量环(Loop)体积不