分子遗传学标志检测在白血病分型中的应用(陈冰).pptVIP

COBRA M-FISH Chrom FITC TRITC 1 100 0 2 67 33 3 50 50 4 33 67 5 0 100 M-FISH基本原理（2） 46,XY,1q+,7q- M-FISH的优点 一次实验可对整个基因组进行分析 适于检测染色体数目异常及一些结构重排 M-FISH的缺点 无法分析倒位与微小的扩增/缺失 aCGH Array-CGH 用于检测基因组不平衡性的重要技术，其分辨率比传统的比较基因组杂交（CGH）提高了20-100倍，也达到了检测基因拷贝数异常的精确度。 局限性在于无法检测出平衡易位、倒位、插入和复杂核型；不能检测性染色体的不平衡；也无法检测小于其分辨率的基因组不平衡异常。 * 白血病细胞遗传学研究方法——标本来源和采集 骨髓： 3-5ml ； *取自肿瘤组织本身 外周血： (1) WBC10x109/L; (2) 原、幼细胞百分比10% *分裂相均来源于白血病细胞 *无脂肪颗粒，标本质量好 淋巴结： 穿刺液或活检标本 *骨髓浸润时可用骨髓标本 白血病细胞遗传学研究方法——染色体制备方法 直接法： 不经培养立即处理 短期培养法： 按1-3x106/ml细胞密度接种到培养基 培养24-48h 同步法： 应用MTX或Fdu处理17h，使其同步化 白血病细胞遗传学研究方法——染色体显带 Q带： 荧光很快褪色，标本不易保存 C带： 染色体着丝粒显带，对染色体识别帮助不大 G带： 带纹细致，解象力强 末端呈浅带，不利于该区异常的识别 对分裂相数量及质量要求高，条件欠稳定 R带： 带型与Q、G带相反 除Y染色体外，末端均呈深带，揭示该区的缺失与易位 方法简便，重复性好，可成批显带 对分裂相量少质差的肿瘤细胞显带成功率高 带纹不如G带精细，难以识别微小异常 核型分析的优缺点 直观，能同时检测全部染色体数目、结构异常 为形态学检查，灵敏度有限 必须有可分析的中期分裂相，无法分析间期核 荧光原位杂交（FISH） 染色体荧光原位杂交技术在肿瘤遗传学研究中的应用 FISH的基本原理： 单链DNA（探针）和与其互补的DNA（玻片上的标本）退火杂交 Denature Hybridization 单一序列基因探针（单标、双标） 染色体着丝粒探针 染色体涂色探针 M-FISH FISH探针的选用： 白血病的染色体异常： 染色体数目异常的检测 染色体结构异常的检测 易位 倒位 FISH在白血病中的应用: 白血病的MICM诊断---常见染色体易位的检测 鉴别标志染色体,发现、确定新的染色体易位， 有助于定位克隆新的疾病基因 白血病疗效判断,鉴定BMT后造血细胞的克隆起源 白血病预后判断,检测微小残留病和监测早期复发 FISH正常信号 FISH融合信号（间期核） 单一基因探针 单标记FISH inv (16) M4Eo FISH探针的选用： 单一基因探针 双标记FISH t (15;17) M3 (APL) t (8;21) M2b / M4 t (9;22) CML FISH探针的选用： Chr 22 (BCR) Chr 9 (ABL) der 9 (ABL con BCR) der 22 (ABL con BCR) 染色体着丝粒探针 检测染色体数目异常 染色体定位标记 着丝粒及着丝粒周染色体易位 FISH探针的选用： 全染色体涂抹 (Chromosome painting) FISH探针的选用： chr8 dup8 FISH检测的优点（1） 直观，是细胞遗传学和分子生物学之间的桥梁 敏感性和特异性高 能分析一部分显带技术不易分辨的异常， 如某些倒位、丢失、复杂畸形等 FISH检测的优点（2） 与细胞形态学结合，有助于深入理解疾病的 发病机制 能检测石蜡固定和Right’s染色标本 多色FISH可在同一标本上同时检测多种序列。 FISH检测的优点（3） 间期核FISH： 不需体外培养，对非分裂细胞即可快速检测 可对终末分化的细胞进行检测 在极短的时间内可检测大量细胞 FISH检测的缺点 染色体异常的检测受限于相应探针的获得 对三体检测的敏感性高于对单体或缺失的检测 标本的限制（骨髓、外周血标本优于实体瘤或石蜡包埋、冰冻切片标本） 一次杂交只能检测1至数个异常，不能同时对整个