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植物转基因过程 DNA分子杂交技术 高考总复习.生物 高考总复习.生物 * 高考总复习.生物 * 高考总复习.生物 17 ☆ 选修3 ☆ 现代生物科技专题 DNA重组技术的基本工具 1.基因工程的概念 基因工程是指按照人们的愿望,进行严格的设计,通过__________和__________,赋予生物以__________的遗传特性,创造出符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在__________上进行设计和施工的,又叫做__________。 DNA重组技术 体外DNA重组 转基因技术 新 DNA分子水平 结 果 基本过程 操作水平 操作对象 操作环境 生物体外 基因 DNA分子水平 剪切 拼接 导入 表达 人类需要的基因产物 基因拼接技术或DNA重组技术 实质:基因重组 2.基因工程的基本工具 (1)“分子手术刀”—— __________ ①来源:主要是从__________中分离纯化出来的。 ②功能:能够识别双链DNA分子的某种__________的核苷酸序列,并且使每一条链中__________部位的两个核苷酸之间的__________断开,因此具有__________性。 ③结果:经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式:__________和__________。 专一 限制性核酸内切酶(限制酶) 原核生物 特定 特定 磷酸二酯键 黏性末端 平末端 (2)“分子缝合针”——__________ ①两种DNA连接酶(大肠杆菌DNA连接酶和T4-DNA连接酶)的比较: a.相同点:都缝合__________键。 b.区别:大肠杆菌DNA连接酶只能将双链DNA片段互补的__________之间的磷酸二酯键连接起来;而T4DNA连接酶能缝合_____________。 ②与DNA聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将__________加到已有的核苷酸片段的末端,形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接__________的末端,形成磷酸二酯键。 DNA连接酶 磷酸二酯 黏性末端 两种末端 单个核苷酸 两个DNA片段 DNA连接酶 注:DNA连接酶与DNA聚合酶的比较 DNA连接酶 DNA聚合酶 作用实质 都是催化两个脱氧核苷酸 之间形成磷酸二酯键 是否需模板 不需要 需要 连接DNA链 双链 单链 DNA连接酶 DNA聚合酶 作用过程 在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键 将单个脱氧核苷酸加到已存在的核酸片段的3′端的羟基上,形成磷酸二酯键 作用结果 将存在的DNA片段连接成重组DNA分子 合成新的DNA分子 (3)“分子运输车”——__________ ①运载体具备的条件 a.能在受体细胞中复制并稳定保存。 b.具有一至多个限制酶切点,供外源DNA片段插入。 c.具有标记基因,供重组DNA的鉴定。 ②最常用的运载体是__________,它是一种裸露的、结构简单的、独立于__________核区DNA之外,并具有__________的双链__________DNA分子。 ③其他运载体:__________、__________。 动植物病毒 载体 质粒 细菌 自我复制能力 环状 噬菌体 ①解旋酶:该酶能在DNA复制或转录时破坏DNA碱基对间的氢键,从而将双螺旋打开。 ②DNA水解酶:该酶能催化DNA水解。 ③RNA聚合酶:该酶能在转录时将单个的核糖核苷酸连接成RNA单链。 区分以下几种酶 跟踪训练 (2008 年全国卷Ⅰ)已知某种限制性内切酶在一线性DNA分子上有3个酶切位点,如下图中箭头所指。如果该线性DNA分子在3个酶切位点上都被该酶切断,则会产生a、b、c、d四种不同长度的DNA片段。现有多个上述线性DNA分子,若在每个DNA分子上至少有1个酶切位点被该酶切断,则从理论上讲,经该酶酶切后,这些线性DNA分子最多能产生长度不同的DNA片段种类数是( ) A.3 B.4 C.9 D.12 C 1.(2009年浙江高考题)下列关于基因工程的叙述,错误的是( ) A.目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物 B.限制性核酸内切酶和DNA连接酶是两类常用的工具酶 C.人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性 D.载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞和促进目的基因的表达 【答案】 D 下列有关基因工程技术的正确叙述是( ) A.重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶和运载体 B.所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列 C.选用细菌作为重组质粒的受体细胞是因为细菌繁殖快 D.只要目的基因进入了受体细胞就能成功实现表达 【答案】 C 基因工程的基本操作程序 基础梳理 基因工程的基本操作程序包括:目的基因的获取
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