代谢调节与发酵工程解读.ppt

代谢调控若干问题探讨 华东理工大学 储 炬 微生物的生命活动是由产能与生物合成的各种代谢途径组成的网络，互相协调来维持的。每一条途径是由一些特异的酶催化的反应组成的。许多这些反应的结果造就了一个新生的细胞。微生物要在自然界生存与竞争，就必需生长迅速，能很快适应环境。 微生物的代谢网络是受到高度调节 1)微生物生长在含有单一有机化合物为能源的合成培养基中，所有大分子单体(前体)，如氨基酸的合成速率同大分子，如蛋白质的合成速率是协调一致的。 2)任何一种单体的的合成，如能从外源获得，只要它能进入细胞内，单体的合成自动中止。参与这些单体生成的酶的合成也会停止。 微生物的代谢网络是受到高度调节 3)微生物只有在某些有机基质，如乳糖存在时，才会合成异化这些基质的酶； 4)如存在两种有机基质，微生物会先合成那些能异化更易利用的基质的酶，待易利用的基质耗竭才开始诱导分解较难利用基质的酶； 5)养分影响生长速率，从而相应改变细胞大分子的组成，如RNA的含量 微生物的代谢网络是受到高度调节 微生物具有很强的适应环境变化的能力。它可以通过调整其代谢机能来响应环境的变化。如给予细菌不同的养分，细胞的大分子组成会起相应的变化。 例如，改变培养基的成分，维持培养温度不变，可以改变鼠伤寒杆菌的生长速率，用倍增或世代时间来表示其生长速率，见表3-1。 微生物的代谢网络是受到高度调节 一种诱导酶表达控制作用的Jacob-Monod模型 代谢途径的各种调节方式 一种诱导酶表达控制作用的Jacob-Monod模型 分解代谢物阻遏的分子水平的机制 反馈阻遏在分子水平上的作用机制 反馈阻遏在分子水平上的作用机制 反馈抑制 这是一种常用于组成代谢的负向变构控制。 代谢工程 代谢工程（metabolic engineering），又称途径工程，是由美国学者Bailey J E (1991)首先提出[8]。他把代谢工程定义为，用重组DNA技术操纵细胞的酶运输和调节功能来改进细胞的活性。Stephanopoulos等认为，代谢工程是一种提高菌体生物量或代谢物产量的理性化方法。 研究内容 l).在微生物体内建立新的代谢途径以获得新的代谢物(如链霉菌的聚乙酮)； 2) 生产异源蛋白(如人体胰岛素，人血清白蛋白)； 3) 改进己存在的途径(如抗生素，工业酶的生产)。 研究方法 1) 生理状态研究； 2) 代谢(物)流分析； 3) 代谢流控制分析； 4)代谢途径热力学分析； 5) 动力学模型。 目前代谢工程的研究工作主要集中在代谢分析上。 代谢流的研究任务 对已知途径而言，是了解生物过程环境变化时对代谢流及其分布的影响，确定流向终产物的比例； 对未知途径而言，是主要途径的鉴别，副产物途径的了解以便指导遗传操作，克服微生物自身的遗传机制，去除副途径。 代谢工程可在以下几个方面得到广泛的应用： 1) 改进由微生物合成的产物的得率和产率； 2) 扩大可利用基质的范围； 3)合成对细胞而言是新的产物或全新产物；4)改进细胞的普通性能，如耐受缺氧或抑制性物质的能力； 5)减少抑制性副产物的形成； 6)环境工程方面； 代谢工程可在以下几个方面得到广泛的应用： 7)药物合成方面，作为中间体的手性化合物的制备； 8)在医疗方面 用于整体器官和组织的代谢分析；用于鉴别藉基因治疗或营养控制疾病的目标； 9)信息传导途径方面，即信息流的分析，为了治疗疾病而进行基因表达的分析和调节，需了解信息流的相互作用和控制。 代谢工程 代谢工程的要素是将分析方法运用于与物流的定量化，用分子生物技术来控制物流以实现所需的遗传改造。 微生物次级代谢与调节 次级代谢产物是某些微生物在生命循环的某一个阶段产生的物质，它们一般是在产生菌生长中止后合成的。微生物产生的次级代谢物有抗生素、毒素、色素和生物碱等。 微生物次级代谢的特征 次级代谢产物一般不在产生菌的生长期产生，而在随后的生产期形成。 种类繁多，含有不寻常的化学键，如氨基糖、苯醌、香豆素、环氧化合物、麦角生物碱、吲哚衍生物、吩嗪、吡咯、喹啉、萜烯、四环类抗生素等。 一种菌可以产生结构相近的一簇抗生素。例如，产黄青霉能产生至少10个具有不同特性的青霉素。 微生物次级代谢的特征 一种微生物的不同菌株可以产生多种在分子结构上完全不同的次级代谢产物，例如，灰色链霉菌不仅可以用于生产链霉素，还可用来生产白霉素、吲哚霉素、灰霉素、灰绿霉素等。 不同种类的微生物也能产生同一种次级代谢产物。 次级代谢产物的合成对环境因素特别敏感。其合成信息的表达受环境因素调节。如对抗生素的合成需在较低的磷酸盐浓度0.1~10mM范围内进行，而生长能耐受的范围平均要大10倍，即.3~300mM。 微生物次级代谢的特征 微生物由生长期向生产期过渡时