发酵工程实验指导书2012资料.doc

发酵工程实验指导书 辽宁石油化工大学环境与生物工程学院主编 实验学时：24学时 适用专业：生物工程生物技术是当前优先发展的高新技术之一，本课程是为了和生物工程专业理论教学相配合，通过实践教学，培养学生对生物工程专业知识的具体实际应用的能力。 发酵工程实验是以实验操作为主的技能课程，是生物工程专业学生的必修课，是在学生学习了《生物化学及实验》、《微生物学及实验》等专业基础课及专业实验课的基础上开设的，课程目的在于通过本课程的实验训练，使学生对整个微生物生产过程有一个全面的认识和理解，既可培养他们实际操作的技能，又可达到提高他们理论联系实际能力的目的。通过学习，使学生能掌握发酵工程常用的实验方法和常见的发酵工程设备，为以后的学习和科研工作打下良好的基础。 实验一、细菌增殖曲线的测定实验、枯草芽孢杆菌的紫外线诱变选育实验、备注：。 实验总时间为24学时，包括设计实验、准备实验、进行实验、书写实验预习及最终报告及所需仪器药品清单等。　　。 。1、复习微生物学及实验过程所学到的微生物培养的方法和过程，了解影响微生物生长各种条件因素。 2、独立查阅相关资料，设计实验方案，并对实验所需的各种药品、玻璃仪器及分析设备列出清单，写出详尽的试验过程及需要。 3、三人一组，互相配合，开展实验，动手完成实验，并记录并分实验中的实验现象、数据，必要时及时修改试验计划。 4、总结试验数据，经教师认定后，撰写实验报告。 1.菌株：自然界中分离到的目的菌株　　 2 3.蛋白酶产生菌筛选培养基：葡萄糖0.05,氯化钠0.5%，磷酸氢二钾0.05%，磷酸二氢钾0.05%，酪蛋白1%，琼脂2%，pH 7.5。 4.器材：培养皿吸管250ml三角瓶无菌水（含玻璃珠）玻璃刮铲吸管 5、蛋白酶产生菌培养基上形成菌落后，可在平板上滴加2.5%三氯乙酸溶液，以刚铺满平皿为度，菌落周围如有无色透明圈出现，说明该菌产蛋白酶。 五、试验报告记载要求 1、姓名、班级、学号、试验开始日期/时间2、实验的设计方案、所用的仪器名称、药品名称及重量；所使用的样品名称、来源3、试验操作步骤记载4、实验条件记载（温度、浓度、仪器条件等）5、实验分析6、实验中应注意的问题收获 实验二 枯草芽孢杆菌的紫外线诱变选育 一、实验目的与要求 目的： 通过实验，观察紫外线对枯草芽孢杆菌的诱变效应，并学习物理因素诱变育种的方法。 1、复习微生物学及实验过程所学到的微生物培养的方法和过程，了解影响微生物生长各种条件因素。 2、独立查阅相关资料，设计实验方案，并对实验所需的各种药品、玻璃仪器及分析设备列出清单，写出详尽的试验过程及需要。 3、三人一组，互相配合，开展实验，动手完成实验，并记录并分实验中的实验现象、数据，必要时及时修改试验计划。 4、总结试验数据，师认定后，撰写实验报告。 DNA的分子结构发生改变（同链DNA的相邻嘧啶间形成共价结合的胸腺嘧啶二聚体 器皿：紫外线灯（15W）；试管、锥形瓶、移液管、玻璃珠、培养皿； 培养基及药品：牛肉膏、蛋白胨、可溶性淀粉、NaCL、水、碘液。 四、实验方法、操作步骤 1、菌悬液的制备： 取培养48小时的活化枯草芽孢杆菌的斜面1—2支，用10ml无菌生理盐水将菌苔洗下，并入盛有灭菌玻璃珠的小三角烧瓶中，振荡10分钟，以打碎菌块。菌悬液以10倍稀释法稀释成10-1-10-8稀释液。 2、平板制作：将淀粉琼脂培养基溶化后，冷至55℃左右时倒平板，凝固后待用。 3、紫外线处理： （1）将紫外线灯开关打开预热约20分钟。 (2) 取直径6cm无菌平皿9套，涂平板取10-6、10-7、10-8三个稀释度涂平板，每个稀释度涂平板3只，每只平板加稀释菌液0.1ml，用无菌玻璃刮棒涂匀。 (3) 将盛有菌悬液的平皿置于紫外线灯下分别搅拌照射0分钟 、3分钟及5分钟。 4、培养：将上述涂匀的平板，用黑布（或黑纸）包好，置37℃培养48小时。注意每个平皿背面要标明处理时间和稀释度。 5、计数：将培养48小时后的平板取出进行细菌计数，根据对照平板上菌落数，计算出每毫升菌液中的活菌数。同样计算出紫外线处理3分钟、5分钟、7分钟后的存活细胞数及其存活/致死率。 6、观察诱变效应：将细胞计数后的平板，分别向菌落数在5—6个左右的平板内加碘液数滴，在菌落周围将出现透明圈。分别测量透明圈直径与菌落直径并计算其比值（HC值）。与对照平板进行比较，根据结果，说明诱变效应。并选取HC比值大的菌落移接到试管斜面上培养。此斜面可作复筛用。 五、实验结果 将实验结果填入下表 存活率致死率%) 10-6 10-7 10-8 紫外线（UV） 0（对照） 5 7 表2 诱变结果（透明圈和菌落直径大小） 透明圈和菌落直径大小（㎜）及