细胞生物学实验指导(植物版)精要.docVIP

细胞生物学实验 实验一 不同显微镜的使用及细胞一般形态结构的观测 [实验目的] 通过本实验，使学生巩固普通光学显微镜的使用，学习相差显微镜、暗视野显微镜和荧光显微镜的使用方法，学习显微测量及显微摄影的操作方法，增强对细胞的形态和真实大小的感性认识。 通过本实验操作，要求学生掌握细胞形态结构的基本观测方法与技术，为进一步的细胞生物学研究打好基础。 [实验原理] 应用显微镜的成像原理(详见翟中和等主编《细胞生物学》，第三章第一节)，同时借助显微镜的镜台测微尺和目镜测微尺，两尺配合使用，进行测量和运算，观察细胞形态，得出细胞的大小。 该实验完成需时6学时。 [实验材料、试剂和仪器] 一、仪器 普通光学显微镜、相差显微镜、暗视野显微镜、荧光显微镜、显微拍摄系统、37℃温箱、镜台测微尺、目镜测微尺等。 二、材料 洋葱根尖切片标本，念珠藻永久装片，兔肝细胞标本，夹竹桃花丝毛细胞，人口腔上皮细胞等。 三、试剂 生理盐水，10μg/mL罗丹明123染液（溶于甲醇，避光于4℃保存） [实验步骤] 一、暗视野显微镜观察夹竹桃花丝毛细胞 1、取一张清洁的载玻片，滴上一滴生理盐水。用镊子轻轻夹下一根夹竹桃花丝，置生理盐水中，盖上盖玻片，略微压片，用滤纸条吸去盖玻片四周多余的水分。 2、将上述装片置于显微镜载物台上，在10×物镜下找到夹竹桃花丝毛细胞清晰的图像。 3、换上暗视野聚光器，调节至最佳位置，通过聚光器上的调中螺旋调节聚光器的中心位置，得到最好的暗视野图像效果。 4、观察夹竹桃花丝毛细胞内部的显微结构和细胞质环流现象，并拍照。 5、换用高倍物镜观察时，要换用与高倍镜相匹配的暗视野聚光器，重复以上调节步骤。 二、相差显微镜观察夹竹桃花丝毛细胞 1、取一张清洁的载玻片，滴上一滴生理盐水。用镊子轻轻夹下一根夹竹桃花丝，置生理盐水中，盖上盖玻片，略微压片，用滤纸条吸去盖玻片四周多余的水分。 2、将装片置于载物台上，在明视野用聚焦螺旋聚焦样品，将观察到的夹竹桃花丝毛细胞移到视野中央。 3、换上10×相差物镜和相应的相差聚光器，完全打开聚光器的孔径光阑，装上绿色滤光片，调节光源，使视野内亮度均匀。 4、拨出目镜，插入中心望远镜，找到环状光阑的亮环和相板的黑环，调节聚光器，使二者完全重合。 5、拔出望远镜，插入目镜，镜检、拍照。 6、换用高倍相差物镜观察时，要换用与之相匹配的聚光器环状光阑，重复以上调节步骤。 三、荧光显微镜观察人口腔上皮细胞 1、用灭菌的牙签刮取口腔上皮细胞，涂于洁净的载玻片上，滴上一滴罗丹明123染液，于37℃温箱温育30min。 2、盖上盖玻片，吸去多余的液体。 3、将装片置于载物台上，10×物镜下找到样品焦面，关闭透射光，置于激发光为蓝光、发射绿色荧光的滤片组合块下观察线粒体。必要的话，可换用40×荧光物镜进一步观察、拍照。 四、测微尺的使用操作 1、卸下目镜的上透镜，将目镜测微尺有刻度一面向下装在目镜镜面上，再旋上目镜的上透镜。 2、将镜台测微尺有刻度一面朝上放在载物台上夹好，使测微尺刻度位于视野中央。调焦至看清镜台测微尺的刻度。 3、小心移动镜台测微尺和目镜测微尺(如目镜测微尺刻度模糊，可转动目镜上透镜进行调焦)，使两尺左边的0点一直线重合，然后由左向右找出两尺另一次重复的直线(图1)。 4、记录两条重合线间目镜测微尺和镜台测微尺的格数。按下式计算目镜测微尺每格的长度等于多少μm 目镜测微尺每格的长度（μm）=镜台测微尺的格数/目镜测微尺的格数*10 图1 目镜测微尺的标定 上：目镜测微尺，下：镜台测微尺 五、几种不同类型细胞形态的观察及大小测量 观察各种装片标本，注意不同类型细胞的形态及大小差异。 用目镜测微尺和镜台测微尺测量细胞的长、短径或半径的长度，每类被测物测3个 数据，最后取平均值。 [实验结果] 将上述观察及测量结果记录于下表，并计算细胞的大小。 细胞名称 形态特征 长、短径或半径（微米） 细胞面积（平方微米） [注意事项] 1、荧光镜下观察细胞时，由于荧光易淬灭，观察时要尽量快。 2、荧光探针都有一定的毒性，因此操作时要注意防止污染皮肤和环境，如弄到手上或桌子上，应及时冲洗。 [实验报告] 完成上述表格。 思考：不同物镜放大倍数下，目镜测微尺每格的单位是否相同？ 思考：不同类型显微镜的适用范围有何不同？ 实验二 细胞膜的渗透性观察 [实验目的] 通过本实验，学习、掌握观察、研究细胞膜物质通透性作用的实验方法与技能。了解细胞膜对物质通透性的一般规律。了解溶血现象及其发生机制。 [实验原理] 细胞膜是细胞与环境进行物质交换的选择通透性屏