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* * 刘建国 中国石油大学（华东）生物中心 真空冷冻干燥技术 干燥时保持物质不致腐败变质的方法之一，常用的干燥方法有许多，如晒干、烘干等。 常用的干燥方法 缺点 （1）在0oC以上或更高的温度下进行。干燥所得的产品，一般是 体积缩小、质地变硬，有些物质发生了氧化； （2）一些挥发的成份大部分损失掉； （3）有些热敏性的物质，如蛋白质、维生素会发生变性，微生 物会失去活力； （4）干燥后的物质不易在水中溶解等。 冷冻干燥 将含有大量水分的物质，预先进行降温冻结成固体，然后在真空的条件下使水蒸气直接升华出来，而物质本身剩留在冻结时的冰架中。 产品的干燥基本上在0oC以下进行，即在产品冻结的状态下进行，直到后期，为了进一步降低产品残余的水分，才让产品升至0oC以上的温度，但不会超过产品的最高耐受温度。 冷冻干燥的优点 （1）冷冻干燥在低温下进行，对许多热敏性物质特别适用。如蛋 白质、微生物等。因此在医药上得到广泛应用。 （2）在低温下干燥时，物质中一些挥发性物质损失小。 （3）在冷冻干燥中，微生物的生长和酶的作用无法进行，因此能 保持原有的性状。 （4）冻干前后体积基本不变，保持了原来的结构，不会发生浓缩 现象。 （5）干燥后的产品疏松多孔，呈海绵状，加水后溶解迅速完全， 几乎立刻恢复原来的性状。 （6）干燥在真空下进行，氧气极少，一些易氧化物质得到保护。 （7）干燥能排除95-99%以上的水分，使干燥后的产品能长期保存 而不致变质。 冷冻干燥技术的历史 早期发展中的三件里程碑事件 （1）美国宾州大学的Flosdorf和Mudd，在1933年用玻璃器皿系统，首次实现血清的冷冻干燥。 （2）1928年，Fleming发现了青霉素（Penicillin）；1938年，牛津大学的Chain实现了青霉素的冷冻干燥，并和Florey一起，使冻干的青霉素在二战期间的临床医学上得到了重要应用。他们三人于1945年获得生理学-医学诺贝尔奖。 （3）为解决巴西咖啡过剩的问题，雀巢公司于1938年发明了咖啡的冷冻干燥。 这三件事推动了微生物和食品冷冻干燥的发展。但早期系统由玻璃器皿组成，冻源是干冰。自1930年起，以氟利昂为制冷工质的机械式制冷装置的兴起，为冷冻干燥技术的推广提供了条件。1940-1960年是冻干发展较快的时期，此后一段时期没有大的进展。 20世纪90年代，由于生物药品的出现和发展，对冷冻干燥技术提出了许多新的近乎“苛刻”的要求，迫使其向深入的方向发展。 冷冻干燥的操作过程 产品分装 冻干箱空箱降温 真空泵预热 产品预冻 到达预冻最低温 度1-2小时后 抽真空升华 第一阶段干燥 第二阶段干燥 冻干结束 产品最高耐受 温度数小时 冷冻干燥操作（一）：产品分装 （1）产品分装形式：散装和瓶装。散装可使用金属盘、玻璃器皿；瓶装可使用血浆瓶、疫苗瓶、青霉素瓶等； （2）容器在使用前应进行清洗和灭菌处理； （3）为了保证产品干燥后具有一定的形状，物质含量应控制在10-15%之间； （4）容器表面积要大一些，厚度小一些。表面积大有利于升华，产品厚度大不利于升华，一般分装厚度不大于10mm 。 冷冻干燥操作（二）：产品预冻 （1）预冻方法：冻干箱（冷阱）内预冻和箱外预冻。 （2）箱外预冻：低温冰箱或酒精加干冰；旋冻器可将大瓶的产品边旋转边冷冻成壳装结构，然后再进入冻干箱内；离心式预冻法是利用真空下液体迅速蒸发，吸收本身的热量而冻结。旋转的离心力是防止产品中的气体溢出，使其“平静地”冻结成一定的形状。 （3）生物物质的冷冻过程首先从纯水结冰开始，冰晶的生长逐步造成电解质的浓缩，随后是低共熔混合物的凝固，最后全部变为固体。 预冻过程对产品的影响 （1）机械效应：细胞内外冰晶生长而产生的机械力量所引起，特别是对有细胞膜的生命体影响较大，一般冰晶越大，细胞膜越易破裂。缓慢冷冻产生的冰晶较大，快速冷冻产生的冰晶较小。 （2）溶质效应：由于水的冻结使间隙液体逐渐浓缩，从而使得电解质浓度增加，进而引起蛋白质的变性。 溶质效应在某一温度范围最为明显，这个在水的冰点和溶液共熔点之间，若能以较快的速度越过这一温度范围，溶质效应所产生的效果就能大大减弱。 （3）冰晶的大小对干燥速率和干燥后产品的溶解度具有一定的影 响。大的冰晶易升华，但溶解慢；小的冰晶不利于升华，但溶解快，且干燥后更能够反映产品原来的结构。 所以，需要一个最优的冷却速率，以得到最高的细胞存活率，最好的产品物理性状和