《实验诊断学》红细胞与白细胞数量测定实验.docVIP

《实验诊断学》实验报告 实验一 红细胞计数、白细胞计数 学 院： 专 业 年级： 学 号： 姓 名： 实验日期： 2015 实验原理 1.红细胞计数 用等渗稀释液将血液稀释一定倍数，充入计数池中，于显微镜下计数一定体积内的红细胞数，经过换算求得每升血液中的红细胞数量。 2.白细胞计数 血液经白细胞稀释液稀释，成熟红细胞全被溶解，在显微镜下计数一定体积内白细胞数，换算出每升血液中白细胞数量。 实验内容与步骤 1.实验器材 改良Neubauer计数板、显微镜、盖玻片、试管、微量吸管、移液管、洗耳球、生理盐水、RBC稀释液、WBC稀释液（冰乙酸3ml、蒸馏97ml、10g/L亚甲蓝溶液3滴 混合过滤后备用） 2.实验步骤 （1）红细胞计数 1、取红细胞稀释液2.0ml毫升，放入一小试管内。 2、用微量吸管吸至l0ul处。? 3、擦去管尖外部余血将血液迅速轻轻吹入盛有红细胞稀释液的试管内，?上清液嗽洗吸管2-3次，立即摇匀。? 4、将计数池与盖玻片用软布料擦净，将盖玻片覆盖于计数池上。 ?5、用吸管吸取混匀的红细胞悬液，充入计数池中。? 6、待3~5分钟，让红细胞完全下沉后，将计数板平放在显微镜台上，用低倍镜观察，如红细胞分布均匀即可换高倍镜进行计数。? 红细胞计数的区域：?中心大方格中的5个中方格(正中一个和四角各一个)。? 计数原则：?数上不数下，数左不数右的计数原则即凡压在中方格边线(双线)上的红细胞，只计上侧与左侧线上的细胞，而压在下侧与右侧线上者不计入。 计算方式： RBC/L＝5个中方格内RBC数×5×10×200×106 ＝5个中方格内RBC数/100×1012 参考值： 男 性：(4.0～5.5)×1012/L 女 性：(3.5～5.0)×1012/L 新生儿：(6.0～7.0)×1012/L （2）白细胞计数 1、?取小试管一支，加白细胞稀释液0.38ml。? 2、?用微量吸管准确吸收末梢血20ul,擦去管外余血，将吸管插入试管中稀释液底部，轻轻将血液放出，并吸取上清液清洗吸管两次，混匀。? 3、?待红细胞完全破坏，液体变为棕褐色后，再次混匀后充池，静置2~3min，待白细胞下沉。? 4、?用低倍镜计数四角4个大方格内的白细胞数，对压线细胞按“数上不数下、数左不数右”的原则进行计数。 计算方式： WBC/L＝(4个大方格内WBC数/4) ×10×20×106 ＝(4个大方格内WBC数/20)×109 参考区间： 成年男性：（3.97~9.15） 红细胞计数实验结果如下图： 左上角方格 右上角方格 右下角方格 左下角方格 正中方格 表细胞分类计数表 42 130 224 84 80 RBC/L＝5个中方格内RBC数×5×10×200×106 ＝5个中方格内RBC数/100×1012 ＝（42+130+224+84+80）/100×1012 ＝5.60×1012 本实验使用的血液标本来自于一52岁男性，成年男性红细胞量参考范围(4.0～5.5)×1012/L。因此实验测得数据略大于正常范围。 白细胞计数实验结果如下图： 右上角方格 左下角方格 右下角方格 左下角方格 表细胞分类计数表 51 80 81 103 WBC/L＝(4个大方格内WBC数/4) ×10×20×106 ＝(4个大方格内WBC数/20)×109 ＝[(51+80+81+103) /20] ×109 ） 红细胞计数： 本实验使用的血液标本来自于一52岁男性，测得红细胞量为 5.60×1012 。 成年男性红细胞量参考范围(4.0～5.5)×1012/L。因此实验测得数据略大于正常范围。 就实验结果来说，只是略大于正常范围，应当可以接受。但是在实验过程中也出现了一些不规范的操作或失误。比如：在使用移液管时双眼未平视液面最底部与刻度线相切；在使用微量吸管的时候，吸取血液的量有偏差，而且在吸取上清液清洗微量吸管时，有少量上清液被吸入胶头，造成结果偏差；观察右下角方格中的红细胞时，发现其中有聚集在一起的红细胞团，推测可能是血液在微量吸管中时间过长，发生凝固，亦或是加入红细胞稀释剂