狂犬病SRV9病毒糖蛋白基因重排质粒pMD-NG及其辅助表达质粒的构建.pdfVIP

本文是国家自然科学基金项目 “犬瘟热病毒N基因．犬细小病毒VP2基 因构建重组狂犬病病毒的研究，， 的部分研究成果 (项目编号 (新疆农业大学) 万方数据 狂犬病病毒SRV9糖蛋白基因重排质粒pMO—NG 及辅助表达质粒的构建 摘要 测序鉴定。结果表明狂犬病病毒SRV9的N基因高度保守，没有发生突变，M基因发生 两处同义碱基突变。 件分析N蛋白、G蛋的抗原位点和疏水性没有变化，表明所构建的辅助质粒可以用于狂 犬病病毒SRV9基因重排的反向遗传学系统。 P．M基因，将融合基因克隆于 通过重组PCR技术分别融合SRV9N．G基因和SRV9 pMDl9．T克隆质粒中进行酶切测序鉴定。除融合基因的个别碱基发生无意义突变外， 融合部位完全。融合部位的忠实度说明采用重组PCR方法构建病毒全长eDNA简便快 捷、行之有效的一种方法。 关键词：狂犬病病毒SRV9；RT-PCR；重组PCR；基因重排 万方数据 Constructionon PlasmidofN-GGeneand Rearrangement Helper in RabiesVirus PlasmidsSRV9 Expression Abstract L inrabiesvirus were The flame of and SRV9 by N，只M，G genes amplified openreadingsequences RT-PCR．The was amplifiedfragments were into vectorsinturn，and ligatedpMDl9-T 6384bp(U)，respectively,thenamplifiedfragments identifiedb DNA resultswereshownN of was YPCR，enzymedigestion，andsequencing．The geneSRV9 twositesofmutationsinM were nomutationwas seen， conservative，and found，whereas gene hi曲ly tothenonsensemutation． belonging Five Plasmids protein(M)， auxiliaryExpressioncontaini