利用脂肪酸氧化途径阻断方法生产新型PHA材料及其PHA单体可控平台的初步探索.pdfVIP

摘 要 恶臭假单胞菌KT2442 是一种可以利用广泛碳源来生产中长链聚羟基脂肪酸 酯的单胞菌，其生产的聚羟基脂肪酸酯主要由 3 羟基已酯，3 羟基壬酯，3 羟基 癸酯和 3 羟基十二酯四种单体组成。在此次研究中，我们把分别涉及 β氧化第一 步和第三步反应的 3 羟基乙酰辅酶 A 脱氢酶与酰基辅酶 A 脱氢酶相关的同功酶 基因在 KTOY08G 突变菌的基础上完全敲除，结果发现突变菌积累的 PHA 是一 种双单体组成的结构，甚至出现了完全的均聚物结构。 PHA 成份组成主要由供给的碳源决定。当我们分别以 C10、C12 和 C14 作 为单一碳源底物的时候，其积累的 PHA 分别包含有 100%的 3HD，84.26%的 3HDD 和 78.7% 的 3HTD 。能够得到这些新型的中长链PHA 是聚羟基脂肪酸酯合 成上一次伟大的突破，尤其是均聚物 PHD 的获得。 在接下来的物理性能测试中，我们发现这种新型的单体组成结构具有更好的 物理性能和热力学性能。其中 P(15.74%HD-HDD)聚合物的熔点高达 77.62℃,这 是目前世界上已知中长链 PHA 能达到的最高熔点，另外均聚物 PHD 的熔点也能 达到 72.2℃。这三种聚合物的玻璃化温度和拉伸强度相对于其他已知中长链PHA 来说都有一些升高和增强。值得一提的是均聚物 PHD 的拉伸强度高达 12MP， 这些热力学和机械性能结果似乎都暗示着这些新型的 PHA 比起传统的中长链 PHA 具有更高的结晶度和拉伸强度。 关键词：聚羟基脂肪酸酯，β-氧化途径，均聚羟基癸酸酯，恶臭假单胞菌 Abstract Pseudomonas putida KT2442 produces medium-chain-length polyhydroalkanoates consisting of 3-hydroxyhexanoate (3-HHx), 3-hydroxyoctanoate (3-HO), 3-hydroxydecanoate (3-HD), and 3-hydroxydodecanoate (3-HDD) from a wide range of carbon sources. In this study, when gene (PP2047 and PP2048) encoding 3-hydroxyacyl-CoA dehydrogenase and gene encoding acyl-CoA dehydrogenase which were might isozyme in step 1 and step 3 ofβoxidation respectively, were completely deleted in Pseudomonas putida KTQQ20, the PHA accumulated was shown to contain only two different monomer structures dominated by a monomer of the same chain length as that of the fatty acids fed and another monomer two carbon atoms shorter, even homopolymer. When C10, C12 and C14 fed as sole carbon source, the accumulated PHA was contained 100%HD, 84.26%HDD, and 78.7%HTD respectively. It is grein breakthrought to get such mcl-PHA, expecially homopolymer PHD w