水稻灌浆初期高温胁迫下的籽粒全长cDNA文库构建.pdf

摘要 摘要 前期研究中，本课题组采用基因差异显示技术和比较蛋白质组学方法获得了与水 稻灌浆期应答高温热害有关的54个差异表达基因片段和21个差异表达蛋白，但是 建水稻灌浆初期高温胁迫下的籽粒全长eDNA文库。本文以高温胁迫条件和常温对照 eDNA 条件下的水稻籽粒混合样品，利用Clontech公司生产的SMARTPCR Synthesis 化大肠杆菌DH5a；通过单克隆挑取和培养，获得了7974个阳性克隆，其中插入目 的eDNA片段大于1．0kb的克隆有5074个，占克隆总数的63．6％；插入目的片段小 于1．0kb的克隆数为2900个、占克隆总数的36．4％。 随机挑取其中34个克隆进行测序，测序结果在Genbank的水稻EST数据库比对， 结果显示插入目的片段大于1．0 kb的克隆中，75％为水稻EST数据库中最长的eDNA； 隆的数量和测序及比对结果可以看出，本文所建文库包含水稻中绝大多数基因表达的 eDNA信息，文库质量较好，为进一步获得与水稻灌浆期耐热性相关的差异表达基因 和编码差异表达蛋白基因的EST全长奠定了良好的基础。 关键词：水稻；灌浆初期；高温胁迫；籽粒；全长eDNA文库 Abstract Abstract In different and21 different 011Ipreviousstudy,54 fragments expressinggene functionalwereidentifiedcDNA-AFLPdifferent displaying proteins by genes expressing and 54different and21 technology proteomics，respectively,however，thedisplaygenes different functionalwere notfull orderto fullthe mRNA，In displaying proteins length get cDNA construction at lengthmRNA，Full-lengthlibrary ofrice panicleearlymilkystage under this cDNAswere stress．Thus，in hightemperature study,fulllength synthesizedby theSMARTPCRcDNA Kit Clontech themixed Synthesis producedby company,with ofriceunder stressandnormalcultural panicles hightemperature an