水稻光温敏核不育系对南方水稻黑条矮缩病毒的抗性反应的研究.pdf

广西大掌博士掌位论文 水稻哭j鼠敏核不育系对南方水稻黑条矮缩痨毒的抗性反应研究 水稻光温敏核不育系对南方水稻黑条矮缩病毒的抗性反应研究 摘要 本研究以19个水稻光温敏核不育系为材料，对南方水稻黑条矮缩病毒(Southern riceblack-streaked 受SRBSDV侵染后的生理变化、抗性遗传规律、NBS类抗病基因进行研究，得出如 下主要结果： 1、SRBSDV的鉴定方法及19个水稻不育系对SRBSDV的抗性评价： 根据已公布的SRBSDV 特异引物，利用分子生物学与田间调查相结合的方法，参照广东省生物防治实验站关 于南方水稻黑条矮缩病发生规律与防治技术调查研究方案中的标准进行病株分级，对 生产上常用的19个水稻不育系进行株高调查、病级划分，统计计算其发病率、病情 指数、相对发病率。以病情指数类平均法(UPGMA)聚类分析，聚类结果将19个不 未发现免疫的材料。 2、SRBSDV侵染水稻的生理生化变化： (1)SRBSDV感染的再生稻根系形态和根系活力变化 以经鉴定为高抗、中抗、高感的水稻光温敏核不育系各1个为材料，每种不育系 选取发病等级为0级、1级、2级、3级的材料，采取水培的方法进行再生繁殖，研 究SRBSDV感染对不育系再生稻根系生长的形态变化和根系活力变化。结果表明， 在没有SRBSDV侵染(0级)时，高抗和中抗不育系的根长分别是感病不育系的1．53 和1．43倍，根表面积分别是感病不育系的1，66和1．27倍，根体积分别是1．78倍和 1．13倍，根系活力分别是1．45倍和2．27倍，但是三者的根尖数没有显著差异。高抗 与高感不育系的上述指标之间差异显著，高抗和中抗不育系差异不显著。受到 SRBSDV侵染时，不育系内不同发病等级间随着发病程度的增高，各指标呈现明显 下降趋势，除了高抗不育系的根尖数，其余各基因型内各指标均随着发病等级的增加 而表现出显著差异。SRBSDV感染对根系的影响主要表现为根系的粗细不同。 水稻光温敏核不育系对南方水稻黑条矮缩病毒的抗性反应研究 (2)水稻光温敏不育系对SRBSDV的抗性与内源激素的关系分析 Liquid 理植株中含量平均值显著低于其对照植株，在第5和第6天感病症状开始出现时达到 最低值；在164S处理植株中IAA含量平均值显著低于其对照植株，GA3含量平均值 也低于对照植株，但未达到5％显著水平。2)抗御信号分子SA在处理植株中含量平 均值显著高于对照植株，在感病症状开始出现时，其含量都达到最高值，但培矮64S 在最高值后开始较快下降，而164S的SA含量则保持显著高于对照植株的水平。3) 与衰老、死亡有关的内源激素ABA在处理植株中含量高于对照植株，培矮64S的 SRBSDV胁迫改变了植株体内IAA／ABA和GA3／ABA的平衡。 (3)SRBSDV实时荧光定量PCR检测方法的建立及其各病级的病毒含量 针对SRBSDVCP基因设计了1对特异性引物，以水稻UBC为内参基因，建立 SRBSDV time CP两步法realPCR绝对定量检测方法。对感SRBSDV的0级、1级、 2级、3级水稻植株叶片SRBSDVCP基因的拷贝数进行绝对定量，结果显示，通过 内参UBC校正后，病级之间SRBSDVCP基因拷贝数差异显著。 3、不育系对SRBSDV的抗性遗传分析： 以经鉴定为中抗和高抗SRBSDV的水稻光温敏核不育系及感病对照TNl为材 料，应用经典遗传学分析方法研究4个抗SRBSDV亲本抗病基因的对数。结果显示， 因控制。 4、水稻系列不育系抗病基因同源序列的克隆与测序分析： 本研究根据NBS．LRR类保守氨基酸序列设计引物，对水稻系列不育系进行抗病 基因同源序列进行克隆与分析，结果显示，18个水稻不育系亲本及抗感病对照恩恢 II 广西大掌博士攀位论文 水稻光温敏核不育系对南方水稻黑条矮缩精毒的抗佳反应研究 氨基酸相似性为49．5％～83．6％，与已知的9个NBS抗病基因氨基酸序列一致性为 26．2％～100．O％。 关键词：水稻光温敏核不育系；SRBSDV(南方水稻黑条矮