重组腺病毒AdrIL-10转导骨髓基质细胞对脓毒症保护作用的研究（二）——重组腺病毒Ad-rIL-10质粒的构建.pdf

重缀腺病毒Ad—rIL-10质靛的掏建 重组腺病毒Ad—rIL—10转导骨髓基质细胞对 脓毒症保护作用的研究(二) 0质粒的构建 一重组腺病毒Ad—rIL—1 专 业：外科学 硕士研究生：摩冰 导 师：来家源毹教授 摘要 脓毒症(sepsis)是当前危重痫医学耐临的棘学问题，由其导致的脓毒性体克 (sepsisshock)、多嚣富功貔薅碍绞合锺(multipleorgandysfunction 内静死亡率毒速60％。因就，避一步阐骥脓毒瘥鹣发病瓠灌辜霪疯瑾生瑾炎伲，蔽 采取针对性的治疗是降低死亡率的关键。 脓毒症是指由感染引起的全身性炎症反应综台征(systemioinflammatory responsesyndrome，SIRS)，并谖实有细麓存在或离发可疑感染瘸灶者。脓毒症 发生时机体免疫系统受到强烈刺激，进而引起多种生物级联反应，包括焱症反应 过程(各秘缯麓因子、趋豫霆孑等参与)，凝集纾港系统改变戳及缨瑰存活死亡乎 衡关系的变化等。这些生物性变化在脓毒症的致病过程及器官功能障碍形成中有 黧窭酶{篝精【ll，露箕串过纛炎症爱纛较旱发生量占攥重要瓣遮经。翠孩绥稳、重噬 细胞及中性粒细胞受到感染及非感染性刺激时释放致炎介质(TNF—a和IL—1)和 调节往缅麓园子(IL-6)，觚而启动瀑布祥炎症级黻反应。潮时，激活的宿主缅簏还 释放抗炎介质(IL-IO和TGF一引以对抗敬炎介质的作用，继而失控的炎癜引起中 性粒细胞、内皮细胞黏附，凝血系统的激活和次缀炎症介质的释放(其他细胞因 予、前列艨素类、塞三烯帮蛋盎戆类等)，导致广泛弱内皮损伤、毛细巍管渗透 重组腺病毒Ad·rlL·10质粒的构建 性增加、血液动力学紊乱、微循环血栓、组织缺血甚至是多器官功能障碍，最终 导致死亡【2J。目前研究认为，细胞因子在脓毒症的致病过程中起了非常重要的作 用，SIRS和代偿性抗炎反应综合征(CARS)是脓毒症的重要病理生理变化，脓毒症 早期全身炎症反应是炎性细胞因子尤其是肿瘤坏死因子a．(TNF-n)、白细胞介素 脓毒症发生早期即增加IL一10等抗炎介质，而下调致炎性细胞因子的水平，使得 致炎细胞因子和抗炎细胞因子保持平衡，将对脓毒症、多器官功能障碍起到一定 的保护作用。 目前脓毒症仍无确切有效的方法。传统治疗包括抗生素治疗和免疫调节治疗 (抗内毒素抗体、抗TNF—a抗体、IL一1受体拮抗剂、磷脂酶A2拮抗剂、PAF拮 抗剂、抗氧化剂、凝血酶抑制剂、粒单细胞集落刺激因子(GM—CSF)等)，这些治 疗仅限于某种因子或药物可部分降低TNF—a水平，未完全从脓毒症发生机制来提 供更为有效的治疗方法，即未真J下找到下调脓毒症中致死效应细胞因子水平的方 法。虽然实验动物中取得一定效果，但在病人中未能提高治愈率及生存率【4-5]。 近年来IL一10受到广泛关注，被认为是体内最重要的抗炎细胞因子。IL一10具 有很强的抗炎及免疫抑制活性，它能抑制IL．2、IFN．Y及促炎因子的产生和释放： 可减少免疫受体MHC II的表面表达；能抑制人的Th2细胞，导致细胞增生和细胞 【6J。在脓毒症动物模型中，IL．10明显抑制TNF．Ⅱ及巨噬细胞炎性蛋白2(MIP．2) 的表达，对降低死亡率具有重要的作用。但是重组IL．10的生物半衰期较短，必 须持续给予重组IL．10才能维持较高的浓度。 随着分子生物学的迅猛发展，基因治疗这门新兴领域正在形成。细胞因子基 因治疗是当今最为热门的基因治疗技术之一，它是将细胞因子基因作为目的基因 导入细胞，使其在宿主体内或某一局部持续性产生、分泌一定量的细胞因子而达 到治疗目的的新型治疗方法。该种基因技术填补了外源性细胞因子体内生物半衰 期短、需要连续大剂量用药、很难保持稳定的血药浓度等缺点。本实验拟构建鼠 IL一10腺病毒载体的重组质粒，转染骨髓基质细胞，使宿主体内能持续产生一定 量的IL．10，维持较高的、有效的血药浓度，上调IL．10的表达，下调TNF．a的 水平，从而达到对脓毒症的保护作用。国外已有资料显示，Takakuwa【7】报道采用