针灸抗突变效应实验研究.pdf

中文摘要 针灸抗突变效应的实验研究 摘 要 研究目的:本试验以小鼠骨髓细胞微核试验，染色体 畸变试验和姊妹染色单体交换试验，来检验针灸的抗突变 效应。 方法:1.动物分组及治疗方法:将实验动物随机分为 正常对照组;阳性对照组1II:针灸预防组1II:针灸治 疗组111。每组8只。针灸各组均取用双侧足三里、关元 穴;选穴参 照 《实验针灸学比照大鼠及人体穴位而定。 足三里穴0.28mmX15mm针，刺入0.3cm，行平补平泻后， 留针5分钟。关元穴用北京华丰医用器材厂生产的小艾灸 壮，用镊子夹住，在输穴上方lcm处行温和灸3分钟。24 小时一次。阳性对照组腹腔注射环磷酞胺50mg/kg,I组 24小时后处死、II组48小时后处死。预防组I针灸24 小时后、预防组II针灸 48小时后腹腔注射环磷酞胺 50mg/kg,24小时后处死口治疗I组经腹腔注射环磷酞胺 50mg/kg后即针灸24小时后处死，治疗II组针灸48小时 后处死。2.观察指标与方法:2.1小鼠嗜多染红细胞及骨 髓有核细胞微核:小鼠颈椎脱臼处死，剪取双侧股骨，剪 掉股骨头，露出骨髓腔。用注射器吸取小牛血清lml，将 针头插入骨髓腔内少许，将骨髓腔内骨髓冲入离心管内， 然后，用吸管轻轻地抽吸，使成均匀的混悬液，以1000rpm 离心10分钟，吸去上清液。把沉淀物混匀，吸取一小滴 中文摘要 放在载物片的一端，推片后，在空气中晾干。甲醇固定5 分钟。把固定后的片子直接放入1:lOGiemsa磷酸缓冲液 中 (PH6.8)，染色15分钟。观察记数摄影:光镜下每组 标本统计10000个嗜多染红细胞，10000个其他骨髓有核 细胞计算出微核率。选择典型的细胞微核进行摄相。 2.2小鼠骨髓细胞染色体畸变:预处理 :分裂细胞中的染 色体常挤成一堆，在显微镜下不易观察。为了使染色体散 开需要用秋水仙素预处理。在处死小鼠前 4小时，按 4mg/kg腹腔注射。取材:小鼠颈椎脱臼处死，剪取双侧 股骨头，露出骨髓腔。用注射器吸取生理盐水2ml，将骨 髓腔中的骨髓用生理盐水冲入离心管内，打碎骨髓团快， 使成均匀的混悬液，以l0001Pm离心10分钟，用毛细吸 管吸去上清液。低渗:加0.075mol/L氯化钾 7ml，低渗 20分钟。固定:加入固定液 (甲醇冰醋酸3:1液)1-2ml, 然后l000r/min离心10分钟，吸去上清液。固定10分钟 后，轻轻地抽吸将细胞团块充分打碎，继续固定巧分钟， 再以1000r/min离心10分钟。吸去上清液，再加固定液 0.5m1，制片。制片:将沉淀物充分打匀成细胞混悬液，从 3-5cm高处滴4-5滴在玻片上，在室温下自然干燥。染色: 把固定后的片子直接放入 1:lOGiemsa磷酸缓冲液中 (PH6.8)，染色20分钟。然后以自来水向有细胞的玻片 背面缓缓冲去多余浮色，干燥后镜检。观察分析摄相:先 在低倍镜下按玻片顺序寻找背景清晰，细胞分散良好，染 色体收缩适中的中期分裂相，然后在油镜下进行分析。每 组观察 1000个中期相细胞。选择典型的染色体畸变细胞 进行摄相。 中文摘要 2.3小鼠骨髓细胞姊妹染色单体交换:采用活性炭吸附法。 活性炭置于 105℃干燥2小时。取过滤灭菌过的Brdu水 溶液(20mgBrdu/ml)1ml加入100mg处理过的活性炭。 用恒温磁力搅拌器振荡2小时以后备用。给小鼠腹腔注射 2次，相隔9小时，每次用0.75mlBrdu活性炭水溶液。 第2次注射后12小时，腹腔注射秋水仙素4mg/kg.2小 时后按常规作骨髓染色体标本。染色:标本于37℃干燥 24小时。将标本放在60℃恒温水浴锅的平面上，玻片上 盖上一2XSSC(0.3mol几氯化钠和0.003mol几柠檬酸三 钠)液，用15瓦紫外线灯直接照射30分钟。用蒸馏水冲洗。 以3%吉姆萨 ((PH6.8)染色10分钟。观察记录摄相:选 择细胞轮廓完整、染色体展开良好、区分染色好、含有二 倍体数的细胞观察记数口于油镜下每组观察 100个并摄 市目。 结果::1.小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的变化:针灸各组小鼠 骨髓嗜多染红细胞微核变化的检测结果见表1。结果显示: