皱纹盘鲍与刺参卫星dna位点的分离筛选.pdfVIP

皱纹盘鲍(Haliotisdiscus 中文摘要 本文简介了微卫星DNA的发展历程，微卫星位点的分离和分析方法及其在水产养 殖中的应用，并对微卫星作为遗传标记的优缺点进行了探讨，同时，运用经典分子生物学 方法和磁珠富集法分别进行了皱纹盘鲍、剌参微卫星DNA的分离筛选。 1皱纹盘鲍微卫星DNA的筛选 运用经典分子生物学方法，即构建基因组文库，通过放射性【y．”P1标记的探针进行 48个，重复次数最多的达到104次；重复核苷酸中以双核苷酸和四核昔酸较多，分别为 Primer5软件设计出81对引物。 根据得到的皱纹盘鲍微卫星DNA保守序列，用Primer 2刺参微卫星DNA的筛选 磁珠富集法是一种快速、高效的分离微卫星分子标记的方法。本研究通过磁珠富集 bp片段，连上接头，构建“基因组PCR文库”。用生物素标记的简单重复序列(CA)15作 探针与其杂交，杂交复合物结合到包被有链霉亲和素的磁珠上，经一系列的洗涤过程，去 除磁珠表面不舍有微卫星的片段。将吸附在磁珠上的片段洗脱，PCR扩增放大后进行连接 转化。 本研究又通过同位素标记的探针(cA)l 5进行二次杂交筛选，获得阳性克隆113个， 5．0 设计引物80对。 关键词：皱纹盘鲍；刺参：微卫星；磁珠富集：引物设计 一 篁墼垄丝!里!!!!坐坐!竺!!!!型』量型竺竺!!型生翌坚鲤!兰型燮呈呈里竺垒竺生竺坌堕堕垄 Abstract nis thesisintroduced the and methods．the in development，isolationanalysis application ofmicrosatell讧e aquacultrue molecular the and as markers．discussingadvantagesdisadvantages a thesametime the marker，at microsatelliteDNA with genetic screening classical respectively molecularmethodsand enrichment beadsinthe magnetic Pacific disc“J by Abalone(Haliotis andSea hannaO cucumber(Apostichopusiapnicusl? l IsolationofMicrosatelliteMarker inthePacific discus Abalone(Haliotis hannaO 0nehundredandtwo mierosatellitewere