脱氧雪腐镰刀菌醇致小鼠骨骼畸形模型建立及差异蛋白的筛选.pdfVIP

脱氧雪腐镰刀菌烯觏腻艄㈣螂㈣ 差异蛋白的筛选 研究生：朱小明 专业：病原生物学 导师：于爱莲教授 张忠副教授 中文摘要 目的 双向电泳技术筛选正常胎鼠骨骼与DON所致畸形骨骼的差异蛋白，为进一步阐明 DON致骨骼畸形的分子机制奠定基础。 方法 1、腹腔注射四种剂量DON毒素染毒，获取胎鼠骨骼，骨骼软骨双染色法染色， 解剖显微镜观察胎鼠骨骼软骨形态学变化。2、应用研磨法、超声裂解法和裂解液法 Isoelectric SE600 浓度，确定上样量。3、使用Ettan FocusingSystem和Hoefer IPGphor Master软件对正常对照组与 分离总蛋白，银染，获取双向电泳凝胶图谱，应用Image 10mg／kgDON处理组蛋白点间量变变化情况进行分析，筛选差异蛋白。 结果 1、DON对胎鼠体重和每胎产仔数的影响 毒素处理组胎鼠平均体重分别为4mg／kg组1．10士0．09g、6．4mg／kg组0．98士0．08 g、8．4mg／kg组0．90士O．10g和10mg／l(g组0．81士O．09g。毒素处理组平均每胎产仔 数分别为4mg／kg组6．83士3．87只、6．4mg／kg组6．00士3．63只、8．4mg／kg组5．00士3．29 只和10 mg／kg组5．17士2．71只。实验组胎鼠体重和每胎产仔数与空白对照组相比， 骨畸形， 以颈椎体融合、 种畸形， 包括胸骨缺失、 肋骨缺失、肋骨胸骨不对称融合、融合肋、两侧肋骨数目不一、分叉肋，该部位6种 畸形均多见。胸椎腰椎共出现15种畸形，以胸椎椎体缺失、腰椎椎弓融合、胸椎椎 体碎裂为主。实验还出现3种四肢部位畸形、2种尾部畸形和多种其它部位的畸形。 四种剂量中10 mg／kg组引起的畸形种类最多、畸形程度最严重。颈部畸形中10 mg／kg组颈椎体融合畸形率、颈椎体缺失畸形率、颈椎弓融合畸形率、颈肋畸形率均 高于两对照组，差异有统计学意义，P0．05。胸骨肋骨畸形中10 mg／kg组胸骨缺失 畸形率、肋骨缺失畸形率、融合肋畸形率、两侧肋骨数目不一畸形率、分叉肋畸形率、 不对称胸骨连接畸形率均高于两对照组，差异有统计学意义，P0．05。胸椎腰椎畸形 中10 mg／kg组胸椎椎体缺失畸形率和腰椎椎弓融合畸形率均高于两对照组，差异有 统计学意义，P0．05。此外10 mg／kg组六趾畸形率、卷尾畸形率均高于两对照组， 差异有统计学意义，P0．05。 3、DON所致畸形骨骼软骨蛋白的双向电泳实验结果 成功提取了胎鼠脊椎中骨骼软骨的总蛋白，获得了10 DON致小鼠骨骼软 mg／kg 骨畸形的双向电泳图谱，经Image 上调蛋白点3个，下调蛋白点19个。 结论 l、DON可降低孕鼠每胎产仔数和胎鼠体重，具有胚胎毒性； 2、DON具有致小鼠骨骼畸形的作用，可诱导小鼠产生多种骨骼软骨畸形，以中 轴骨骼畸形为主。腹腔注射10 mg／kgDON导致多发性骨骼软骨畸形，可用于制备胎 鼠骨骼畸形模型； 3、应用双向电泳技术获得DON致小鼠畸形骨骼