人超氧化物歧化酶-过氧化氢酶融合基因的构建、表达及其产物的初步纯化和性质研究.pdfVIP

( ) 第 40 卷 第 1 期 福州大学学报 自然科学版 Vol． 40 No． 1 2012 年 2 月 Journal of Fuzhou University( Natural Science Edition) Feb． 2012 DOI: CNKI: 35 － 1117 / N．． 1144 ． 022 文章编号: 1000 － 2243( 2012) 01 － 0119 － 07 － 、 人超氧化物歧化酶 过氧化氢酶融合基 因的构建 表达 及其产物的初 步纯化 和性质研究 ， ， ， ， ， ， 盛 明明 吕元辉 李仁宽 缪少锋 程 曦 饶平凡 刘树滔 ( ， 350108) 福州大学生物工程研究所 福建 福州 摘要: 尝试应用基 因工程技术制备一种兼具人超氧化物歧化酶( SOD) 和过氧化氢酶( CAT) 活性的双功能融合 CAT － PTD － SOD ， PTD RKKRRQRRR ． PCR CAT － PTD － SOD 蛋 白 其 中的 是序列为 的短肽 首先通过重叠 构筑 ， Rosetta 2 ( DE3) ． SDS － PAGE 、CAT SOD 融合基 因 然后把该基 因转化进入大肠杆菌表达菌株 菌株 通过 和 活 CAT － PTD － SOD ， 8． 9 % ， 性分析 以及分离纯化组分 的分析确认该重组菌株能够表达 其表达量可达总蛋 白的 SDS － PAGE 显示其分子量约为 85 kD． 可溶性实验发现该融合蛋 白大部分 以兼具 SOD 和 CAT 活性的可溶形式 ． H O CAT － PTD － SOD H O ， 0 ． 033 mol ·L － 1 、 0 ． 067 mol · 存在 抗 2 2 能力实验表 明 具有很好 的抗 2 2 能力 在 甚至 L － 1 H O ， SOD 20 min ． 的 2 2 溶液 中 其 活性 内无 明显下