实验一细菌的革兰氏染色解决方案.pptVIP

实验一 显微镜油镜的使用和细菌的革兰氏染色 一 实验目的 1 学习显微镜油镜的使用方法 2 学习微生物的无菌操作技术 3 学习细菌的革兰氏染色法 二 实验原理 1 显微镜及油镜物镜的使用原理 1) 油镜头的标志 油镜头上常刻有OI（oil immersion）或 HI（homogeous immersion）字样，有的还刻有一圈红线或黑线标记。在低倍物镜、高被物镜和油镜3种物镜中，油镜的放大倍数和数值孔径（numerical aperture）最大，而工作距离最短。 2 ) 显微镜的分辨率 显微镜性能的优劣不单是看它的总放大倍数，更重要的是看它的分辨率的大小。分瓣率是指显微镜能分辨出物体两点间最小距离（D）的能力。D值愈小表明分辨率愈高。D值与光线的波长（λ）成正比，与物镜的数值孔径（NA）成反比： D=λ/2NA 从上式可看出，缩短光波长和增大数值孔径都可提高分辨率。 数值孔径指光线投射到物镜上的最大角度（称镜口角，α）的一半正弦与介质折射率（n）的乘积： NA=n×Sinα/2 影响数值孔径大小的因素－是镜口角，二倍介质的折射率。 当物镜与玻片之间的介质为空气时，由于空气（n=1.0）与玻璃（n=1.52）的折射率不同，光线会发生折射，不仅使进入物镜的光线减少，降低了视野的照明度，而且会减少镜口角。当以香柏油（n=1.515）为介质时，由