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高二生物分离以尿素为氮源的微生物.ppt
实验2 分离以尿素为氮源的微生物 实验目的： 1. 使用专一的培养基（含尿素）分离专一的细菌（有脲酶的细菌）。 2.使用指示剂颜色的变化检知酶（脲酶）所催化的反应。 实验原理： 脲即尿素，是蛋白质降解的产物。有一些细菌含有脲酶可以分解尿素，利用尿素作为其生长的氮源。 设备及用品： 灭菌锅或高压锅、250ml的三角瓶1个和100 ml的三角瓶2个、封口膜和橡皮圈、培养皿4个、接种环和玻璃三角刮刀、恒温培养箱、摇床、酒精灯和超净台、一次性塑料手套、装有酒精棉球的广口瓶、镊子、有盖的试管（15mm×150mm）3支和试管架 实验材料： (1)25mlLB固体培养基：蛋白胨0.25g、酵母提取物0.12g、NaCl 0.25g、琼脂0.5g、加水25ml。 (2) 25ml尿素固体培养基：0.025g葡萄糖、NaCl 0.12g、K2HPO40.12g、酚红0.25mg、琼脂0.5g、加水15ml。灭菌冷却到60℃时加入经G6玻璃漏斗过滤（使其无菌）的尿素。 (3) 实验步骤 (1) 灭菌：将配制好的50mlLB液体培养基和50mlLB液体培养基分别装入两个250ml 的三角瓶中，加上封口膜，用高压锅进行灭菌。 (2) 制平板：在酒精灯火焰旁将固体培养基分别倒在4个培养皿中，使培养基铺平皿底部，待凝，使之形成平面。 (3)接种扩大培养：靠近酒精灯火焰将大肠杆菌接种到三角烧瓶的液体培养基中，三角烧瓶在37℃摇床振荡培养12h。 (4) 划线分离：将摇床上培养12h的菌液在固体培养基的平板上连续划线，然后将盖好的培养皿倒置，放在37℃恒温培养箱中进行培养。 (5)单菌落接种培养：在无菌操作下将单菌落用接种环取出，再用划线法接种在空白斜面上，在37℃下培养24h, 4℃冰箱保存。 实验讨论 实验完成后，接触过细菌的器皿应如何处理？ 实验完成后，所有接触过细菌的器皿都必须先高压灭菌后再洗涤，特别是培养基，有可能被有害菌体污染，在培养繁殖后，大量有害菌体影响人畜健康，也污染环境，因此必须高压灭菌。使用后的废弃物也要高压灭菌后再抛弃。对于取样器的取样头，通常是灭菌后在超声波清洗器中加洗衣粉洗涤纶30 min ,再用清水洗净，仍可再用。封口膜也可再用。 再 见 * * (NH2) 2C=O+H2O 2NH3+CO2 脲酶 本实验目的是从土壤中分离出能利用尿素的细菌，了解它在生态平衡中的作用，并与LB全营养培养基做对照。 *
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