讲义—血红蛋白的提取与分离分析报告.ppt

课 题 3血红蛋白的提取和分离 课题背景 2003年4月14日宣布人类基因组序列图完成这标志着进入了后基因组和蛋白质组时代； 人类基因组：指DNA分子所携带的全部遗传信息 蛋白质组：生物个体表达的蛋白质分子的总和。主要是对蛋白质功能的研究 基础知识 血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，负责血液中O2和CO2的运输。 例1 利用凝胶色谱法，什么样的蛋白质先洗脱出来 A.相对分子质量大的 B.溶解度高的 C.相对分子量小的 D.所代电荷多的 2. 凝胶色谱法分离蛋白质的依据是 A. 对其他分子的亲和力 B. 溶解度 C. 所带电荷多少 D. 相对分子质量的大小 例题1：（2005深圳一模）细菌蛋白质在极端环境条件下可通过肽链之间的二硫键维持稳定。已知不同的多肽产物可因分子量不同而以电泳方式分离。下列左图是一个分析细菌蛋白的电脉结果图， “-”代表没加还原剂，“+”代表加有还原剂，还原剂可打断二硫键，“M”代表已知分子量的蛋白质。右侧数字代表蛋白质或多肽的相对分子量。根据左侧结果，右列哪个图案最能代表该细菌原本的多肽结构？(注意：“—”代表二硫键) 例2 在电场作用下，带电分子会如何移动？ 这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。 4. 分离血红蛋白溶液时，将混合液离心后可看到试管中的液体分为4层：第一层为 ，第二层为 固体，第三层为 的沉淀层，第三层是 液体，是 的水溶液，第四层是其他杂质的 沉淀物。 5.红细胞含有大量的血红蛋白，红细胞的机能主要是由血红蛋白完成，血红蛋白的主要功能是携带氧气或二氧化碳，我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白，请回答下列有关问题： （1）血红蛋白提取和分离的程度可分为四步：______、______、______和______。 4. 下列说法不正确的是 A. 血红蛋白在释放时，加蒸馏水到原血液的体积，再加40％体积的甲苯，充分搅拌 B. 血红蛋白溶液离心后分为4层，第1层为白色薄层固体 C. 血红蛋白溶液离心后分为4层，第4层为暗红色沉淀物 D. 血红蛋白溶液离心后分为4层，第3层为红色透明液体，这是血红蛋白的水溶液 5.实验前取新鲜的血液，要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠，取血回来，马上进行离心，收集血红蛋白溶液。 ①加入柠檬酸钠的目的是__________________ 。 ②以上所述的过程即是样品处理，它包括______、______、收集血红蛋白溶液。 （3）收集的血红蛋白溶液在透析袋中可以经过透析，这就是样品的粗分离。 ①透析的目的是__________________ 。 ②透析的原理是______________________________ 。 （4）然后通过凝胶色谱法将样品进一步纯化，最后经SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。 ①样品纯化的目的是 _________ ____ _______ 。 ②血红蛋白有什么特点？______ _ ______________________ 。 这一特点对进行蛋白质的分离有什么意义？_______________________________。 (2)红细胞的洗涤 ①洗涤红细胞目的 除去其中的杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化，不可洗涤次数过少 ②洗涤操作 A、采集血样 B、低速短时间离心（速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果） C、吸取血浆：上层透明的黄色血浆 D、盐水洗涤：用五倍体积的质量分数为0.9％的氯化钠溶液洗涤 E、低速离心（低速短时间） F、重复4、5步骤三次，直至上清液中已没有黄色，表明洗涤干净 (3)血红蛋白的释放 加蒸馏水到原血液体积，再加40％体积的甲苯 ，置于磁力搅拌器上充分搅拌10分钟（加速细胞破裂）,细胞破裂释放出血红蛋白 (4)分离血红蛋白溶液 ①过程 将搅拌好混合液转移到离心管内，以2000r/min的速度离心10 min 第1层（最上层）：甲苯层（无色透明） 第2层（中上层）：脂溶性物质沉淀层（白色薄层固体） 第3层（中下层）：血红蛋白的水溶液层 （红色透明液体） 第4层（最下层）：杂质沉淀层（暗红色） ②试管中溶液层次 用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出