分离科学---第十章其他分离方法.ppt

“备”则“倍” 有准备、有规划的人生更精彩！ * 环糊精与冠醚、金属离子形成混配配合物，?-CD包络12冠4，12冠4配位金属离子，得到混配配合物。 第十章 其他分离方法 * 环糊精用作色谱固定相进行手性分离： 第十章 其他分离方法 * 第十章 其他分离方法 生物分离 生物技术的主要目标是生物物质的高效生产，分离纯化是重要环节。 生物分离工程包括：目标成分的 提取 浓缩 纯化 成品化 * 第十章 其他分离方法 生物分离过程的重要性： 大多数工业酶分离过程成本占总成本的70%，纯度更高的医用酶则占85%以上； 基因重组蛋白质药物分离成本占85-90% 小分子分离成本低，如青霉素占50%，乙醇仅占14%。 * 第十章 其他分离方法 生物分离过程的特点： 容易失去活性； 热原和异体蛋白质必须除去； 常存在结构相似的成分； 初始浓度一般很低； * 第十章 其他分离方法 生物分离过程的一般流程： * 第十章 其他分离方法 浓缩率 分离因子 平衡分离过程分离因子 生物活性样品分离因子 生物分离的评价指标： T目标 X杂质 C原料 P产品 W废料 A比活 * 第十章 其他分离方法 连续分离回收率 产品活性计算回收率 间歇分离回收率 * 第十章 其他分离方法 1、细胞分离 (1)重力沉降：实际上需要先让细胞或菌体絮凝成较大凝聚体后再沉降，加中性盐或聚丙烯酰胺等，速度慢； (2)离心沉降：可实现差速离心分级 (3)过滤：膜分离技术 * 第十章 其他分离方法 2、细胞破碎 机械破碎、化学破碎、或两者相结合 * 第十章 其他分离方法 细胞机械破碎： 高压、珠磨、喷雾、超声 * 第十章 其他分离方法 细胞化学或生物化学渗透： (1)酸碱调节pH，使蛋白质与其他物质作用减弱而易于溶解； (2)表面活性剂、螯合剂、盐或有机溶剂处理细胞，增大细胞壁通透性，释放内容物； (3)酶溶细胞壁，再利用渗透压冲击等方法破坏细胞膜，释放内容物。 * 第十章 其他分离方法 细胞物理渗透： (1)渗透压冲击：温和，适合易破碎的细胞，讲细胞放置于高渗透压的盐溶液中，平衡后突然稀释或转移到低渗透压的水或缓冲液中，在渗透压的作用下，水渗透进入细胞膨胀破裂。 (2)冻结-融化法。急剧冻结后缓慢融化，反复多次，冻结破坏了细胞膜的疏水结构，增加亲水性和通透性。 * 第十章 其他分离方法 3、初级分离 (1)沉淀分级； (2)泡沫分离。 * 第十章 其他分离方法 盐析沉淀： 蛋白质在高离子强度溶液中发生沉淀的现象，高价阴离子的盐比一价盐的效果好。 NH4+>K+>Na+>Mg2+ * 第十章 其他分离方法 等电点沉淀： 较低离子强度溶液中蛋白质溶解度也较小，特别是在pH值为等电点的溶液中。 有机溶剂沉淀 蛋白质易变性 热沉淀 聚电解质絮凝沉淀 * 第十章 其他分离方法 4、产品的进一步分离 (1)膜分离：亲和膜分离； (2)萃取：反相胶团萃取、双水相萃取； (3)吸附分离(固相萃取)； (4)色谱分离：离子交换、尺寸排阻、反相色谱、亲和色谱； (5)电泳：凝胶电泳、等电点聚焦、二维电泳； * 第十章 其他分离方法 等电点聚焦 * 第十章 其他分离方法 二维电泳 * 第十章 其他分离方法 5、蛋白质复性 稀释复性、辅助因子 6、结晶 过饱和度、温度、溶剂和pH、晶种 7、干燥 真空干燥、气流干燥、喷雾干燥、冷冻干燥 * 手性化合物的分离分析 对映体的物理化学性质几乎完全相同，但他们的生理和药理作用等往往不同。 味精中L-（+）谷氨酸钠的味道非常鲜美，可是D-（-）结构却令人不快。 镇静剂沙立度胺，其R型有效，S型则导致畸形。60年代在欧洲导致多例胎儿畸形。 单一手性单体参与聚合得到的材料与非手性材料相比，质量轻、强度高。手性液晶显示屏，其响应比普通的快。 第十章 其他分离方法 * 拆分和分析方法 分级结晶法拆分。即通过被拆分对象与一光学纯试剂反应，生成非对映异构体。利用他们的物理性质的差异进行分离。 缺点：试剂昂贵，操作费时、后处理麻烦，局限性大，而且要求样品必须有活性基团。 测定方法是比旋光度测定法，该方法要求某一异构体含量>2%才能分辨。其它如同位素法、核磁共振法，虽然分析精度高，但是费用昂贵。 第十章 其他分离方法 * 现代拆分和分析方法：色谱法 GC、HPLC、SFC、CE等，集分离和测定与一体，很容易实现快速定性、定量和制备，并且可以实现复杂基质下对映体纯度的测定。 两种形式：（a）间接法。先用光学纯的试剂反应，生成非