虾夷扇贝体内的一种寄生虫——帕金虫的培养与检测.pdfVIP

虾夷扇贝体内的一种寄生虫— — 帕金虫的培养与检测 隋世峰 国家海洋环境监测中心，辽宁大连（116023 ） E-mail ：wangli1229@163.com 摘 要：2004 年8 月到2005 年9 月间，大连周边海域养殖的虾夷扇贝大规模死亡，在对死亡原 因进行系统调查中，在虾夷扇扇贝体内发现一种寄生于组织内的病原生物。本实验应用液体巯 基醋酸盐鉴别培养基培养法，常规切片法检测虾夷扇贝体内寄生的病原生物，确定此种生物为 一种导致养殖贝类死亡的寄生虫— — 帕金虫P.gugwadi 。这种寄生虫主要寄生于贝类的鳃、外套 膜、消化腺和肾，可造成寄主组织的破坏和正常结构的损伤，并引起器官功能紊乱。 关键词：虾夷扇贝(Patinopecten yessoensis)；帕金虫（perkinsus.gugwadi ）；液体巯基醋酸盐培养 基（FTM ） 帕金虫（Perkinsus.sp ）是一种寄生于海水贝类体内的单细胞原生动物。据国外许多研究表 明 ， 帕 金 虫 的 寄 生 对 贝 类 具 有 极 大 的 危 害 性 （ Soniat,1996; Mackin, 1962;White,Powell,1988;Carfoot,1987;Gnaiger,1983）。从2004 年7 月，大连周边海域养殖的虾夷 贝陆续发生了死亡。这一现象极大的威胁到这一高效海水养殖业的可持续发展。根据国内外贝 类病害的研究结果表明：病原生物是引起养殖贝类病害最主要的原因，其中帕金虫是最常见的 病原生物之一(Mackin,1962) ；而气候异常、养殖环境恶化、养殖密度过大等则是引发病原生物 致病的生态环境因素。在对大连长海县养殖的虾夷贝的死亡调查中，我们在这些虾夷贝体内检 测到了这种能够对海洋贝类造成严重损害的寄生虫— — 帕金虫perkinsus.sp 。因此，进行虾夷扇 贝的帕金虫研究，了解病害发生的生态规律，为确定病害防治技术与对策，保护海洋生物多样 性，减少病害的发生，可奠定一定的理论基础。 到目前为止，已有 6 种帕金虫对海产贝类可造成危害。除了在美洲牡蛎 C.virginica 体内检 测到P.marinus 外，还在澳大利亚黑唇鲍（Haliotis ruber ）体内检测到P.olsen ；在葡萄牙蛤（Tapes decussatus ）体内检测到P.atlanticus ；在海湾扇贝（Argopecten irradians ）体内检测到P.karlssoni ； 在欧洲扁牡蛎体内检测到的 P.mediterraneus 。此外，在虾夷扇贝（P.yessoensis ）体内检测到 P.gugwadi 。当帕金虫寄生于贝类体内以不游动的营养孢子存在时, 直径为 2-10μm (Perkins,1969;1996);当从寄主体内转移到厌氧条件的巯基醋酸盐中培养几天之后,圆形的休眠孢 子直径为 20-200μm,而大多数个体直径为 30-80μm(Perkins,1996); 当休眠孢子接种到海水中后,形 成多细胞的游动孢子囊,双鞭毛的游动孢子就从孢子囊中释放出来,去感染寄主;游动孢子在寄主 体内失去鞭毛后,又形成了营养孢子。据此,Ray(1954,1966)建立了液体巯基醋酸盐培养基(Fluid Thioglycollate Medium,FTM)检测帕金虫方法。在该培养基中,帕金虫营养孢子变成了休眠孢子, 休眠孢子只能生长,不能繁殖,因而可定量地检测贝类体内帕金虫。许多研究业已表明,帕金虫能在 贝类群体中广泛传播,被感染的贝类不能正常生长发育,并常导致大规模死亡(Chagotetal, 1987; Compsetal, 1987; Bo weretal, 1998; Navasetal, 1992; Choietal, 1989; Wilsonetal, 1990; Powelletal, 1996)。因此，我们怀疑大连周边海域养殖的虾夷贝很有可能是因为感染了这种寄生虫而发生严 重的死亡。 1. 帕金虫的培养与检测 1 材料与方法 1.1 样品的采集 - 1 -