2-4基因轉殖技術.docVIP

ERIC BIOLOGY 2-4 基因轉殖技術 焦點 18 載體 功能 能攜帶DNA片段進入合適宿主細胞的物質稱為『載體』 特性 (1)載體本身為分子量較小的DNA，容易進入宿主細胞中。 (2)可在宿主細胞內自行大量複製，亦可隨著宿主細胞的染色體複製而複製（但與宿主染色體複製無關）。 (3)需要有基因插入點（限制酶辨識序列），可供目標DNA（選取的基因、外源基因）插入。 (4)載體經過重組而帶有標誌基因（耐抗生素、抗重金屬、螢光的基因），可用以篩檢宿主細胞是否接受了重組DNA。 種類 通常作為攜帶外源基因的載體有： 細菌的質體、病毒的DNA、反轉錄病毒、噬菌體 試題範例 37.有關於細菌的質體，下列敘述何者正確？ (A)質體為細菌染色體外不含基因的環狀分子 (B)質體可攜帶動物或植物的基因進入細菌體內進行複製 (C)質體在細菌體內的複製與細菌染色體的複製相關 (D)質體所攜帶動植物基因在細菌體內不能表現 【答案】(B) 【詳解】(A)質體由環狀DNA構成，含有基因 (C)質體的複製與細菌染色體的複製無關 (D)質體所攜帶其他生物的基因可在細菌體內表現。 38.重組DNA中的載體具有何種特性？ (A)需容易進入細菌 (B)為雙股DNA (C)不具複製能力 (D)具抗藥性 (E)分子量大於染色體DNA 【答案】(A)(B)(D) 【詳解】(C)因載體為DNA，故具複製能力 (E)載體的分子量小於染色體DNA的分子量。 焦點 19 重組DNA 一、重組DNA之目的： 以人工方法將不同來源的DNA連接起來而成為『重組DNA』 →再藉由『基因轉殖』將重組DNA置入『宿主細胞』（目標細胞） →重組DNA在宿主細胞內進行複製、轉錄和轉譯以合成蛋白質（基因產物） 二、重組DNA的操作過程： 1.目標基因、載體： (1)以細菌質體、噬菌體、病毒DNA、反轉錄病毒作為載體 →載體須帶有特定的標誌基因（耐抗生素、抗重金屬、螢光的基因） (2)以動物、植物、微生物的DNA作為『目標基因』（外源基因） 2.限制酉每：利用『限制酶』（鑑識酶）切開載體和目標基因 (1)限制酶具有高度專一性（僅能辨識特定的一小段核苷酸序列） →由特定的二個含氮鹼基間切開 →使載體與目標基因的二端均形成單股的『黏性端』 (2)黏性端使目標基因與載體之單股DNA能穩定配對而不易斷裂 (3)GAATTC為限制酶『EcoRI』的辨識序列 →EcoRI會切開核苷酸序列中的含氮鹼基G與A之間的磷酸鍵 3.重組DNA： 利用『DNA連接酶』（接合酶）以共價鍵方式將目標基因與載體連結成環狀的重組DNA 4.基因轉殖：將重組DNA置入宿主細胞中 →目標基因隨著載體在宿主細胞內複製、轉錄和轉譯、表現性狀 5.篩選轉形細胞： ∵質體帶有特定的標誌基因（耐抗生素、抗重金屬、螢光的基因） ∴轉形細胞（轉殖成功的宿主細胞）可生長於含抗生素或重金屬的培養基中 未轉殖成功的細胞則無法生存於含抗生素或重金屬的培養基中 試題範例 39.下圖為遺傳工程實驗的部分過程示意圖，甲～丁代表各不同階段參與作用的成分。根據下圖的資料，下列敘述哪些選項正確？ (A)『甲』可以是細菌的質體 (B)『乙』是某種激素分子 (C)『丙』可以是植物的RNA分子 (D)『丁』為抗體分子 (E)圖中各階段的反應都可在試管內反應完成 【98指考】 【答案】(A)(E) 【詳解】甲－載體，乙－限制酶，丙－目標基因（外源基因），丁－DNA連接酶（接合酶）。(B)『乙』是限制酶 (C)『丙』是DNA分子 (D)『丁』為DNA連接酶（接合酶）。 40.下圖為重組DNA過程的模式圖，請參照此圖回答下列問題： (1)一般用來攜帶外來基因進入細菌的載體有哪些？ (2)圖中切開載體與選取基因的酵素是否相同？為什麼？ 【90聯招】 【答案】(1)細菌的質體、噬菌體、病毒的DNA、反轉錄病毒。 (2)相同，使載體與選取基因容易接合成重組DNA。 焦點 20 基因轉殖 基因轉殖 將重組DNA送入宿主細胞中 →目標基因隨載體在宿主細胞內進行複製、轉錄和轉譯、表現性狀 篩選 轉形細胞 ∵質體帶有特定的標誌基因（耐抗生素、抗重金屬、螢光的基因） ∴轉殖成功的宿主細胞（轉形細胞）可生長於含抗生素或重金屬的培養基中，未轉殖成功的細胞則無法生存於含抗生素或重金屬的培養基中 一、基因轉殖動物： 1.方法：將外源基因送入動物的受精卵或早期胚胎細胞 →具有外源基因基因轉殖動物可以表現出外源基因的特性 2.實例： (1)生長激素的基因促進動物生長 例如：基因轉殖的鮭魚較