天然产物黄酮要点.ppt

第四节 黄酮类化合物结构鉴定 黄酮化合物的检识与结构测定现在多依赖于谱学的综合解析，而化学方法和色谱方法已降至辅助地位。 未知黄酮化合物的鉴定，多在测定分子式的基础上，利用PC或TLC得到的Rf与文献比较，或分析对比试样在甲醇溶液中及加入各种诊断试剂后得到的紫外及可见光谱进行剖析。同时，对于化合物的颜色反应，以及在提取分席过程中所表现的行为也注意分析。 1H-NMR谱的测定对分析天然黄酮类化合物的结构，已经成为一种非常重要的手段。但是黄酮类化合物的1H-NMR谱上，有时想要确切指认每个信号并不是一件容易的事。要解决这些问题，13C-NMR技术有很大的优势，因此13C-NMR技术在黄酮类化合物结构鉴定中发挥着越来越重要的作用。质谱技术也是黄酮类化合物结构鉴定的重要手段之一。 实际工作中常常根据需要，灵活、运用上述方法和手段，并辅以必要的化学方法，以求获得满意的结构。 一、 紫外及可见光谱在黄酮类鉴定中的应用 紫外及可见光分光光度法鉴定黄酮类化合物结构的一般 程序如下： 1 测定试样在甲醇溶液中的UV光谱。 2 测定试样在甲醇溶液中加入各种诊断试剂后得到的UV及可见光谱。 3 如试样为苷类，则可进行水解或甲基化后再水解，并测定苷元及其衍生物的UV光谱。 将上述各种光谱图进行对比分析，即可获知有关结构的重要信息。 （二）诊断试剂引起的位移及其在结构测定中的意义 回收醇，加水稀释 水溶液 萃取 水液（水杂） 3-4倍量醇,静置,过滤 多糖,粘液,树胶,蛋白等 醇液 (1). 萃取法 甲醇或甲醇－水提取液(一般相当于生药100-200％) 正丁醇(苷) 乙酸乙酯 (苷元和极 性小的苷) 一、 提取 (2). 碱提取酸沉淀法 黄酮苷虽有一定的极性，可溶于水，但难溶于酸性水，易溶于碱性水，故可用碱性水提取，加酸后可沉淀析出。（如从槐米中提取芦丁)。碱液的浓度不宜过高，以免在强碱下黄酮被破坏。酸化时，酸性也不宜过强(pH 4较好)，以免生成盐重新溶解。当药材中含有大量果胶、粘液等杂质时(如花、果等药材),用石灰乳或石灰水较好，上述杂质可形成钙盐不被溶出，过滤也容易。 一、 提取 1. 柱色谱法 （1） 硅胶柱色谱 适用的范围最广，主要用于分离极性小的化合物。如异黄酮及二氢黄酮醇类。也可采用加水活化后用于分配色谱方法分离极性较大的化合物，如黄酮苷、多羟基黄酮醇等。 （2) 聚酰胺柱色谱 聚酰胺的性质及吸附原理 聚酰胺（Polyamide)高分子聚合物，不溶于水、甲醇、乙醇、乙醚等常用的溶剂，对碱较稳定。对酸尤其是无机酸稳定性较差，可溶于浓盐酸、冰醋酸及甲酸。一般属于氢键吸附。 二、 分离 洗脱剂的洗脱能力 尿素/水 二甲基甲酰胺 甲酰胺 碱水溶液 丙酮 甲(乙) 醇 水 常用的溶剂: 水 乙醇 一般不用含氯的溶剂(可溶解聚酰胺或其中的交联剂)。 二、 分离 结构与吸附力的关系 形成氢键的基团数目越多，吸附能力越强； 易形成分子内氢键者，吸附力降低； 芳香化程度高，吸附力强； 苷元相同时,洗脱先后顺序一般是三糖苷、双糖苷、糖苷、苷元。 母核上增加羟基，洗脱速度即相应减慢。当分子中羟基数目 相同时，羟基位置对吸附也有影响，洗脱顺序为邻羟基、对位（或间位）羟基黄酮。 不同类型的黄酮化合物，流出的先后顺序一般是异黄酮、二氢黄酮醇、黄酮、黄酮醇。 分子中的芳香核共轭双键多着易被吸附，故查儿酮比相应的二氢黄酮难于洗脱。 聚酰胺柱色谱洗脱规律: 聚酰胺柱色谱洗脱规律: (3) 葡聚糖凝胶柱色谱(Sephadex gel) Sephadex LH-20 是SephadexG-25 经羟丙基化处理后得到的产物。葡聚糖凝胶中的葡萄糖部分与羟丙基结合成醚键。虽然分子中羟基数目不少，但所占比重减少,故親脂性增加，可用甲醇、乙醇等溶剂洗脱，也具有一定的吸附能力。 分子量越小或体积越小，越易进入孔中，流出的就越慢。分子量大或体积大，进入孔难，流出的快。 分离黄酮苷元时以吸附作用为主，酚羟基数目越多，吸附力越强(与酚羟基的位置关系不大)。分离苷时，则分子筛的属性起主导作用，分子量小，洗脱难。 三糖苷 双糖苷 单糖苷。 (3) 葡聚糖凝胶柱色谱(Sephadex gel) 分离黄酮苷元时以吸附作用为主，酚羟基数目越多，吸附力越强(与酚羟基的位置关系不大)。分离苷时，则分子筛的属性起主导作用，分子量小，洗脱难。 三糖苷 双糖苷 单糖苷。 (3) 葡聚糖凝胶柱色谱(Sephadex gel) 2. 梯度PH萃取法 乙醚液 5% Na