dnabluntingkit-ウェブカタログ｜タバイオ株式会社 遺伝工学研究.pdfVIP

製品コード 6025 研究用 DNA Blunting Kit 説 明 書 v201508Da DNA Blunting Kit は、T4 DNA Polymerase の 5 → 3 polymerase 活性と 3 → 5 exonuclease 活性を利用 して DNA の末端を平滑化することにより、突出末端の DNA でも簡単に平滑末端のベクターにライゲー ションできるシステムです。 DNA が 5 突出末端の場合は、5 → 3 polymerase 活性により 3 陥没部分に塩基が付加され、5 陥没末 端の場合は 3 → 5 exonuclease 活性により 3 突出部分が削られて、平滑末端になります。この末端平 滑化反応は同時に起こるので、末端形状が不明の DNA でも DNA Blunting Kit により簡単に平滑化する ことができます。末端が平滑化された DNA はタカラバイオ独自のライゲーションシステムにより、効 率よく平滑末端のベクターなどにライゲーションさせることができます。 本製品は突出末端のベクターを平滑末端ベクターに変更する場合にも有効です。平滑化したベクターは、 Alkaline Phosphatase で脱リン酸化して使用します。 また、PCR 法により増幅した DNA 断片は、多くの場合、3 末端に dA が 1 塩基オーバーハングしており、 直接サブクローニングすると効率が悪くなります。このような場合、DNA Blunting Kit を用いて目的 PCR 増幅断片を平滑末端にした後、平滑末端ベクターとライゲーションすると効率よくクローニングで きます。 I． キットの内容（20回分） 1． T4 DNA Polymerase 20 μl 2． 10 × Buffer（dNTP を含む） 30 μl ＊1 3． DNA Dilution Buffer 500 μl ＊2 4． Ligation Solution A 600 μl ×2 ＊2 5． Ligation Solution B 150 μl ＊ 1： 【 組成 】 100 mM Tris-HCl（pH7.6 at 16℃） 5 mM MgCl2 ＊ 2： DNA Ligation Kit Ver.1（製品コード 6021）の組成と同じものです。 II． 保存 － 20℃ III． 原理 5’突出末端の場合 5’陥没末端の場合 5 → 3 polymerase 活性 3 → 5 exonuclease 活性 P (OH) 5’ 3’ OH P (OH) 5’ 3’ OH OH 3’ 5’ P (OH) OH 3’ 5’ P (OH) T4 DNA Polymerase dNTPs P (OH) 5’ 3’ OH