第4章 吸附层析.pptVIP

硅胶薄层薄板的活性测定 苏丹黄、苏丹红、靛酚蓝在活化的薄层薄板上的层析行为 A B C D （3）薄层的活性测定 * 3、样品的要求 （1）样品的浓度 1-5mg/ml （2）样品的纯度 不含盐 （3）样品与吸附剂的作用 （4）样品的溶剂 使用挥发性有机溶剂 * 4、展层剂的选择 （1）种类 单一溶剂、混合溶剂 （2）要求 使样品组分很好地溶解 与样品不发生化学反应 将混合样品较好分离 易挥发、粘度小、组成简单 临时新配，只使用一次 展层剂的极性 在同一支持介质上，溶剂极性愈大，对同一化合物的洗脱能力也愈大，即在薄板上被推进得愈远，Rf值愈大。 * 不同展层剂对物质的分离影响 咖啡酸与绿原酸在极性不同的展层剂中的分离效果 * 特异性显色剂 紫外光、荧光显色 薄板中含荧光素 腐蚀性显色剂 6、显色 5、展层装置与展层过程 （1）使用适当的装置 （2）装置的饱和度对展层的影响 * 6、操作程序 1、制备薄层板 2、点样：点样斑点小，点样量适当 3、展层 4、显色 * 第三节 聚酰胺薄膜层析 * 一、基本原理 聚酰胺是由己二酸与己二胺合成的、含有大量酰胺基团的化学聚合体。它与许多物质通过形成氢键的方式结合，氢键的强弱决定被分离物与聚酰胺薄膜之间吸附力的大小。选择适当的展层剂使被分离物在聚酰胺薄膜表面发生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的连续过程，导致被分离物分离。 * 二、应用1、蛋白质 N 末端的 DNS 分析技术 DNS-蛋白质DNS-肽 荧光试剂（ DNS-CL ） +蛋白质（肽） 酸解 pH2-2.5 抽提 DNS-N 末端氨基酸 层 析 显 色 分析 * 丹磺酰氯与氨基酸反应生成荧光性质强和稳定的磺胺衍生物，也常用于多肽链的N末端氨基酸的鉴定。 * 2、蛋白质的氨基酸组成分析程序 蛋白质在盐酸中水解110℃，18－24小时 中和 DNS-Cl 调pH9-10.5 盐酸调PH 2－3，乙酸乙酯抽提 DNS-氨基酸层析 * * * * * * * * * * * * * * * * * 第三章吸附层析 * 第一节 概述 * 一、基本概念和色谱过程 1、概念 色谱法(Chromatography），也称色层法或层析法。此种方法基于混合液中各组分的分子极性、分子大小与形状、吸附力、亲和力等物理化学性质的差异，导致各组分在流动相和固定相之间的分配系数不同，组分在两相间进行连续多次分配，从而彼此分离。 色谱不只是分离技术，也是一种分析方法。 2、色谱过程 * * 3、色谱方法的共同特点： ①色谱分离体系都有流动相和固定相两个相。 ②色谱过程中，流动相对固定相作连续的相对 运动。 ③被分离样品在两相中具有不同的作用力，各组分混合物在流动相的带动下通过固定相，实现分离。 4、样品在分离时的两个基本点： ①混合物中不同组分在柱内的差速迁移 ②同种组分在色谱体系迁移过程中分子分布离散 * 二、色谱法分类 1、按两相物理状态分类： 用气体作流动相—气相色谱 用液体作流动相—液相色谱 固定相可以是液体或固体，便可组合成四种主要色谱类型： 气－固色谱（gas-solid chromatography,GSC ） 气－液色谱（ gas-liquid chromatography ,GLC ） 液－固色谱（liquid - solid chromatography ,LSC) 液－液色谱（ liquid - liquid chromatography ,LLC * 2、按固定相的形态分类 （1）柱层析 (column chromatography) 固定相装在柱内即为层析柱，根据层析柱的尺寸，结构和制备方法不同，分为填充柱层析和毛细管或开管柱层析。 （2）平板层析(planar chromatography) 固定相呈平板状，包括薄层层析、薄膜层析和纸层析。固定相以均匀薄层涂敷在玻璃板、塑料板或有机薄膜上，或将固定相直接制成薄板状，称为薄层层析(TLC)；用滤纸作为固定相或固定相载体的层析为纸层析(PC)。 * 3、按分离过程物