生物技综合 试验终稿.docVIP

生物技术综合试验 目的：主要是通过本课程的学习，使学生受到严格的基因工程和分子生物学等技术实验技能的训练，熟悉现代生物技术仪器的基本操作使用和应用范围，加深对生物技术系列相关课程基本理论、基本技术原理的理解认识。 实验一、质粒DNA的小量提取 实验二、双酶切反应 实验三、PET28-a质粒载体的胶回收 实验四、引物设计 实验五、目的片段的PCR扩增 实验六、PCR产物的双酶切反应 实验七、PCR产物的胶回收 实验八、目的片段OMP31、BLS与PET28-a载体的连接反应 实验九、大肠杆菌感受态细胞的制备 实验十、重组质粒转化感受态细胞的实验 实验十一、菌落PCR反应 实验十二、IPTG诱导OMP31和BLS融合基因的表达 实验十三、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 实验一、质粒DNA的小量提取 目的要求 掌握用试剂盒提取质粒DNA的技术 掌握用分光光度计测定DNA浓度的方法 基本原理 在染色体外能自主复制且稳定遗产的遗传因子称为质粒，大小在1kb-200kb之间，是双链闭合环状的DNA分子。在细菌、放线菌、真菌以及一些动植物细胞中都发现有质粒存在，其中细菌质粒存在最为普遍，在基因工程中常用作基因载体。碱变性法又称碱抽提法或碱裂解法，是一种用的最广泛的制备质粒DNA的方法，此法是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下，染色体DNA的