人胚胎干细胞研究分析发展.docVIP

人胚胎干细胞’进行 ESC的培养，加入刺激细胞生长的激素、细胞因子等，实验表明ESC增殖旺盛，且能保持未分化状态，并认为无血清培养基优于血清培养基。但也有学者认为含血清培养液更利于胚胎干细胞向中胚层细胞分化,是因为血清中富含中胚层诱导因子,如骨形态形成蛋白(BMP)等。 　4 人胚胎干细胞的实验研究及临床应用 4.1 人胚胎干细胞的实验研究 人ES细胞具有多向分化潜能,能分化为属于内胚层、中胚层和外胚层范畴的多种类型细胞:包括神经细胞、肝细胞、造血母细胞、分泌胰岛素细胞、心肌细胞、内皮细胞等。人胚胎干细胞定向诱导是指在体外把人胚胎干细胞定向诱导成分化成熟功能细胞,而横向分化则是把一种组织的成体干细胞诱导分化成另一种组织的“干细胞”或功能细胞。不论定向诱导,还是横向分化,它们的共同基础都是干细胞基因表达的调控。定向诱导分化根据hESC在离体条件下可分化出不同胚层的分化细胞这一特点,将hESC 与不同类型的细胞共培养或加入相应的生长因子诱导干细胞定向单一类型的细胞分化。目前,hESC体外诱导分化的模式主要有诱导分化、自发分化和基因调控分化等。大量的研究表明转化生长因子(TGF)、骨形态发生蛋白(BMP)、Wnt家族蛋白 (Wnt families)、成纤维细胞生长因子(FGF)以及全反式维甲酸(RA)、二甲基亚砜(DMSO)和垂体后叶素、维生素C、5氮胞苷等可以促进ESC分化为心肌细胞。Laura等将人胚胎干细胞(hESC)体外诱导分化的心肌细胞,培养观察了达3个月,并通过膜片钳等技术来评估其功能成熟情况,以RTPCR来评估编码离子通道的亚基的表达;发现随着体外培养时间的延长,ESC分化的心肌细胞愈接近成熟心肌细胞表型。常静等发现与胎儿心肌细胞的共同培养,能诱导人ESCs发生向心肌方向的分化，人ESCs有望成为心肌干细胞移植的细胞材料。Passier等采用无血清培养基诱导胚胎干细胞,发现心肌自发搏动的数量较含血清培养增加了24倍,如果在培养体系中加入维生素C,分化效率还可以再提高40%。Maxim等发现HESC与骨髓基质细胞或OP9细胞共培养可诱导hESC向造血干细胞分化。Rambhatla等观察到,hESC 培养过程中在二甲基亚砜和丁酸钠依次诱导下形成肝细胞。裴海云等将人胚胎干细胞在细菌培养皿中悬浮培养7d,形成囊性拟胚体,接种至包被有Ⅰ型胶原的组织培养皿,以含有地塞米松、胰岛素的条件培养液进行诱导,条件诱导液培养14 d,结果证实人胚胎干细胞经上述方法培养可向肝细胞分化。Reubinoff等报道,hESC培养过程中加入bFGF、维甲酸和神经生长因子后可形成大量的神经管样结构,并能进一步分化成神经元、星形细胞和少突胶质细胞。Vogel将人ES细胞培养至拟胚体(EBs)后，用神经细胞培养基(常规培养神经细胞的培养基)培养，分离出部分分化的EBs在含碱性成纤维生长因子(bFGF)的培养基中培养，最终获得96%表达神经元标志的细胞。Kwon等在实验中将TAT PDX1融合蛋白转入HESC,从而激活下游靶基因的表达,促进干细胞分泌胰岛素,比较明确的阐明了干细胞向胰岛细胞分化的机制。Kroon等将人胚胎干细胞源性胰腺内皮层移植进入大鼠后有效的产生葡萄糖应答内皮细胞，表明人胚胎干细胞有能力产生葡萄糖应答和胰岛素分泌细胞。Tremoleda等比较人胚胎干细胞与成体干细胞的体内骨分化能力，结果经过成骨因素予处理的hESC均产生成骨，未经过成骨因素予处理的hESC产生骨与软骨;而未经过成骨因素予处理的hMSC则不形成骨、软骨与脂肪组织，经过成骨因素予处理的hMSC产生骨与脂肪组织。Christian等则通过研究得出结论，维甲酸和骨形态发生蛋白两种信号协同，可大大提高人的ES细胞向上皮细胞的直接分化的效率。石伦刚等成功诱导人胚胎干细胞向类间充质干细胞分化。分化获得的细胞增殖能力强,表达间充质干细胞的特异性标志,并具有多向分化潜能。到目前为止,人类胚胎干细胞被成功诱导分化为造血干细胞、神经干细胞、心肌细胞、肝细胞、胰岛细胞、成骨细胞、内皮细胞及滋养细胞等多种细胞,为hESC分化细胞的移植研究与应用奠定了实验基础。　　 4.2 人胚胎干细胞的临床应用 hES可诱导分化为多种细胞，如神经细胞、心肌细胞和肝脏细胞等,通过移植取代体内死亡或无功能的细胞提供长期治疗，可为帕金森病、心脏病、青少年糖尿病和白血病和肝脏疾病等多种临床疾病无限量提供细胞移植供体,从而使此类疾病在治疗上发生革命性变化〔40～44〕。Roberto研究表明,随着胚胎干细胞研究的发展,将其诱导分化为成熟的多巴胺能神经元及用来激活自身体内的修复机制,治疗帕金森病是可能的。通过hESC建立体外分化模型,建立各种基因改变的hESC,可发现某