霍8逸夫楼C上午节详解.pptVIP

* * ⑴ 形态观察 正常成熟的卵母细胞，其细胞质均匀、没有空泡，其周围的卵丘细胞一般发生扩展，去卵丘细胞后，可见到位于卵周隙的第一极体 （三）卵母细胞IVM质量评定 华中农业大学动物科技学院 * * ⑵ 固定染色法 将卵母细胞周围的卵丘细胞用0.1%的透明质酸酶去掉，然后在醋酸酒精或醋酸甲醇（1:3）的固定液中固定24～48h，最后用1%间苯二酚兰 （Lacmoid）或1%地衣红（Orcein）的40%醋酸溶液染色观察 （三）卵母细胞IVM质量评定 华中农业大学动物科技学院 * * 生发泡期（germinal vesicle，GV）：卵母细胞质中可看见到一个大而圆的细胞核（即GV），核膜清晰，界限明显 生发泡破裂期（GVBD）：核膜变得模糊，核膜的一侧出现缺口，染色质隐约可见 卵母细胞的成熟阶段： （三）卵母细胞IVM质量评定 华中农业大学动物科技学院 * * 终变期（diakinesis，DK）：染色质会变短、变粗，随机分布在细胞核区 中期I（metaphase I，MI）：染色体成对排列在赤道板上，并可隐约见到纺锤体 （三）卵母细胞IVM质量评定 华中农业大学动物科技学院 * * 后期I（anaphase I，Ana I）：同源染色体开始分开，但两组染色体的距离并不大 末期I（telophase I，Tel I）：同源染色体分开的距离加大，形成极体的一组染色体向质膜靠近，但此时极体尚未排出 中期II（metaphase II，MII）：卵周隙中可见到极体，与其相邻的胞质中可见到整齐排列的染色体。与MI的染色体相比，MII的染色体小而致密 （三）卵母细胞IVM质量评定 华中农业大学动物科技学院 * * * * ⑶ 受精和胚胎发育潜能的评定 为了解卵母细胞质的成熟情况，通过IVF后的受精分裂率和随后的体外培养胚胎发育率对其IVM的质量进行鉴定，这是评定卵母细胞IVM方法最为重要的一项指标 （三）卵母细胞IVM质量评定 华中农业大学动物科技学院 * * 五、卵母细胞体外保存 （一）37℃保存 应该考虑保存时间与卵老化的问题 排出的卵或由卵泡取出的卵在取出后受精能力有一定限度，所以保存时间不长，即或能受精，也会出现胚胎发育异常 除特殊需要外，一般不在37℃保存 华中农业大学动物科技学院 * * （二）低温保存 低于室温、但还达不到冷冻阶段，以这种方法保存卵和胚胎称为低温保存法。一般在0℃~10℃左右保存。由于温度较低，可抑制物质代谢的速度和细胞分裂的速度，因此可以延长保存时间 五、卵母细胞体外保存 华中农业大学动物科技学院 * * 据报道，在10℃下保存兔卵母细胞，经过24h，受精率可达78％，经过78h，仍可以保持受精能力，但保存温度超过10℃，受精能力显著降低。小鼠卵母细胞受精能力保持时间短，可用含有5%甘油的卵黄柠檬酸Lock’s液、以1℃／min冷却到5℃保存数小时，仍可以很好地受精 （二）低温保存 五、卵母细胞体外保存 华中农业大学动物科技学院 * * 对家畜卵子低温保存的研究报导较少，猪卵母细胞和胚胎对冷冻极敏感，Miyamoto等分别以0.5和3℃／min的速率从30℃降温到20℃、10℃和0℃，而且在这些温度下维持0.1~60 min，然后在37℃悬滴培养40~43h，在30℃、20℃、10℃和0℃时卵子成熟到MⅡ期的百分率分别为54%、18%、0%和0% （二）低温保存 五、卵母细胞体外保存 华中农业大学动物科技学院 * * 猪的GV期卵对降温极为敏感，而牛的GV期卵，在4℃贮存后仍有62%达到MⅡ期，但温度的微小变化 （从37℃降到35℃和33℃）会显著影响牛卵母细胞的IVM和IVF，在33℃、35℃和37℃~39℃时，牛卵母细胞成熟至中期的百分率为2.8%、56.1%和73%，并使卵母细胞的超微结构发生变化 （二）低温保存 五、卵母细胞体外保存 华中农业大学动物科技学院 * * （三）冷冻保存 卵母细胞的冷冻保存与精子和胚胎的冷冻保存一样，具有许多潜在的应用价值 80年代以后，卵母细胞IVM、IVF、核移植，基因转移等相继研究成功 把优良品种动物废弃卵巢中大量卵母细胞冷冻保存，象建立“精子库”和“胚胎库”那样，建立起“卵子库”，不仅可为这些生物技术提供充足的材料，还可为家畜保种和遗传资源的长距离国际间运输提供可能途径 五、卵母细胞体外保存 华中农业大学动物科技学院 * * 卵母细胞的冷冻保存也为稀有动物、濒危动物和其他有价值的雌性个体（如基因工程个体）遗传资源的长期保存带来了希望 卵母细胞的冷冻保存要比胚胎冷冻保存困难得多，特别是未成熟卵母细胞要比正在成熟或已经成熟的卵对低温更加敏感，因此哺乳动物卵母细胞冷冻保存的研究自70年代开始以来进展缓慢，其发展速度远不及胚胎