O型Asia1型FMDV衣壳蛋白嵌合体在杆状病毒表达系统中的表达及其免疫原性的分析毕业设计正文.docVIP

摘要 FMDV属于小核糖核酸（Ribonucleic Acid，RNA）病毒科(picornaviridae)，口蹄疫病毒属(aphthovirus)，口蹄疫病毒能够使大部分偶蹄动物感染、发病，并且能够在大范围内快速传播的烈性传染病，是世界范围内影响经济发展的重要动物疾病。FMDV的基因组为一条由60个重复呈20面体的衣壳蛋白包裹的单股正链RNA，全长约8500nt，衣壳蛋白由结构基因VP1，VP2，VP3，和VP4组成。暴露在衣壳表面的蛋白对病毒的抗原性起到决定作用。Bac-to-Bac BmNPV的宿主只有家蚕，在室内饲养，进化了几千年。与其它的有脊椎动物的病毒相比BmNPV是安全的。在多角体中增加外源蛋白的比例，找到的用多角体蛋白表达外源蛋白。 使用特异性引物通过融合PCR（Fusion PCR）扩增同时含有Asia1型和O型编码衣壳蛋白区域的基因。然后将鉴定正确的基因克隆至供体质粒pFastBacDual。将酶切和测序鉴定正确的重组质粒pFastBacDual转化至大肠杆菌DH10BAC感受态细胞进行蓝白斑筛选。使用cellfectinⅡreagent转染试剂，将PCR鉴定正确的重组杆粒转染Sf9细胞。用重组杆状病毒感染Sf9细胞的方法扩增病毒，用扩增的病毒感染细胞，在感染72h后收获细胞，表达的目的蛋白经Western blotting检测、双抗体夹心ELISA检测。 W