第六章植物的胚胎培养和离体授粉.解读.pptVIP

在无菌条件下，培养离体的未受精雌蕊或胚珠和花粉，使花粉萌发产生的花粉管进入胚珠，完成受精过程而获得有生活力种子的技术。 * （一）离体授粉的基本技术过程 1、亲本的选择： 父本（收集花粉）： 套袋（时期） 表面消毒（时期） 花粉收集（时期） 母本（选取雌蕊或胚珠）： 套袋 表面消毒 去雄 剥取雌蕊或胚珠 不同植物最适时期不同，但必须是未受精状态 2、离体授粉受精： 父本（收集花粉）： * （二）影响离体授粉成功的因素 1 、发育时期 2 、培养基成分 3 、培养温度 4 、材料消毒 5 、母体组织的保留 6、 授粉方式 * （三） 离体授粉技术在杂交育种上的应用 克服植物远源杂交不亲和性 克服自交不亲和性 诱导孤雌生殖 * * * 四、 植物胚乳培养 胚乳培养（Endosperm culture）： 是指将胚乳组织从母体上分离出来，通过离体培养，使其发育成完整植株的技术。 * （二）概述 胚乳培养的最早研究始于1933年，Lampe和Mills首例进行了玉米胚乳培养。胚乳培养的研究主要集中在以下一些问题的探讨： 胚乳细胞的全能性。在离体培养条件下，胚乳细胞是否与其它体细胞和花粉一样，具有全能性而再生植株。 大多数被子植物的胚乳是三倍体，能否通过胚乳培养获得三倍体植株而得到无籽结实；通过胚乳培养技术，探索改良农、林及园 艺植物三倍体育种技术的可能性。 * * 研究离体培养条件下胚和胚乳的关系。 到目前为止，已有40多种植物的胚乳进行了培养。其中苹果、柚、橙、檀香、枸杞、猕猴桃、玉米、大麦、小黑麦、水稻、马铃薯、梨、核桃等的胚乳培养得到了再生植株。其它有的分化除芽、根、叶等或得到愈伤组织。 * 影响胚乳培养的因素 基因型； 胚乳的发育时期； 培养条件； * A、胚乳发育时期的影响 发育早期胚乳：操作不便，诱导率低 游离核期或刚转入细胞期的核型胚乳：难获得愈伤 旺盛生长期（细胞形成期）胚乳：易诱导产生callus 成熟期胚乳：已高度分化，很获诱导脱分化 * 水稻：授粉后4 d 黑麦草：授粉后8-10 d 黄瓜：授粉后7-16 d 梨：授粉后20 d 大麦：授粉后10-20 d 玉米和小麦：授粉后8 -12 d 一些草本植物胚乳培养的适宜取材时期 * B、培养基和激素的影响 基本培养基：MS、B5、MT、White、LS等 水解酪蛋白、酵母提取物也很必要 激素：要求特殊 大麦胚乳只有在添加2，4-D的培养基上才能生长 猕猴桃胚乳培养中，玉米素最好 枣的胚乳培养中，激素似乎无特殊要求 * C、胚因子 胚在萌发时产生某种物质影响胚乳的发育过程，这种胚对胚乳的影响，即称为“胚因子”影响。 胚乳培养中，外源GA3能部分取代胚因子。 * D、其他因素的影响 蔗糖浓度：3%-5% 温度：25℃ pH值：如 蓖5.0; 玉米 6.1-7.0；苹果 6.0-6.2等 * 胚乳培养植株要进行染色体倍性检测 （1）因为在胚乳培养中，由于愈伤组织的倍性比较复杂，有二倍体、三倍体等多种倍性以及非整倍体，真正的三倍体细胞所占的比例甚小。 （2）诱导分化的胚乳植株中染色体数也不稳定，同一植株往往有可能是不同倍性的嵌合体。 * 再生植株的染色体倍数 1、稳定型 继代培养后染色体无变化，植株三倍体 2、畸变型 细胞染色体异常，植株为多倍体，且不一致，形成多种倍性细胞组成的嵌合体。 子房的结构；果实的结构；种子的结构简介 * * 1）玉米种子消毒 2）在黑暗条件下，将种子放在无菌湿润的含滤纸的培养皿中培育6hr。 3）将吸涨的种子在无菌培养皿内将胚分离出来 4）无菌水冲洗3次 5）在MS培养基中暗培养。 6）观察：2d出现胚根，3-4 d出现胚芽，10d长成幼苗。 牡丹种子的千粒重约为150g－180g，所以，播种繁殖的繁殖系数较大，可以在短期内获得大量苗木，根据这个特点，牡丹播种繁殖多用于生产药用牡丹和培养嫁接用的砧木。牡丹单瓣型品种结实力强、籽粒饱满、发芽率高、适应性广、生长势强、变异性小，其中以单瓣型品种“凤丹”最具代表性，所以，在生产药用牡丹和培养嫁接用砧木时，多利用单瓣型品种的种子，特别是“凤丹”用量最大。牡丹半重瓣或重瓣型品种的雄蕊或雌蕊常瓣化或退化，结籽少或不结籽，籽粒瘪，发芽率低，变异性大，所以，半重瓣或重瓣型的种子一般用于新品种选育。无论是单瓣型品种的种子，还是半重瓣、重瓣型品种的种子，播种后3－5年方可开花，但以5 年生以上的植株结籽多，籽粒饱满。 * 因为幼胚是异养型,处于这一时期的幼小胚完全依赖和吸收周围组织的有机营养物质,而成熟胚则为自养型,这一时期