酶生物传感器.解读.pptVIP

环境监侧对于环境保护非常重要, 传统的监侧方法有很多缺点: 分析速度慢、操作复杂且需要昂贵仪器, 无法进行现场快速监侧和连续在线分析。酶生物传感器的发展和应用为其提供了新的手段。 酶生物传感器 湖 南 大 学 生物学院生物医学工程 彭健 S132220018 主要内容 三、酶生物传感器中酶的固定技术 一、酶生物传感器概述 二、酶生物传感器的特点及工作原理 四、酶生物传感器的应用 五、酶生物传感器的总结与展望 自1962 年Clark 等人提出把酶与电极结合来测定酶底物的设想后, 1967 年Updick和Hicks 研制出世界上第一支葡萄糖氧化酶电极, 用于定量检测血清中葡萄糖含量。此后, 酶生物传感器引起了各领域科学家的高度重视和广泛研究, 得到了迅速发展。 （1）发展背景 一、酶生物传感器概述 2、酶生物传感器的定义 酶生物传感器是将酶作为生物敏感基元，通过各种物理、化学信号转换器捕捉目标物与敏感基元之间的反应所产生的与目标物浓度成比例关系的可测信号，实现对目标物定量测定的分析仪器。 3、酶生物传感器的优点 与传统分析方法相比, 酶生物传感器是由固定化的生物敏感膜和与之密切结合的换能系统组成, 它把固化酶和电化学传感器结合在一起, 因而具有独特的优点: （1）它既有不溶性酶体系的优点, 又具有电化学电极的高灵敏度; （2）由于酶的专属反应性, 使其具有高的选择性, 能够直接在复 杂试样中进行测定。 4、酶生物传感器的甚本结构及工作原理 基本结构 酶生物传感器的基本结构单元 （1）由物质识别元件(固定化酶膜) （2）信号转换器(基体电极) 当酶膜上发生酶促反应时, 产生的电活性物质由基体电极对其响应。基体电极的作用是使化学信号转变为电信号, 从而加以检侧, 基体电极可采用碳质电极(石墨电极、玻碳电极、碳栩电极)、Pt 电极及相应的修饰电极。 工作原理 当酶电极浸入被测溶液, 待测底物进入酶层的内部并参与反应, 大部分酶反应都会产生或消耗一种可被电极侧定的物质, 当反应达到稳态时, 电活性物质的浓度可以通过电位或电流模式进行侧定。 （1）电位型传感器是指酶电极与参比电极间输出的电位信号, 它与被测物质之间服从能斯特关系。 （2）而电流型传感器是以酶促反应所引起的物质量的变化转变成电流信号输出, 输出电流大小直接与底物浓度有关。 电流型传感器与电位型传感器相比较具有更简单、直观的效果 5、酶生物传感器的发展 5.1第一代酶生物传感器 第一代酶生物传感器是以氧为中继体的电催化, 以葡萄糖氧化酶(G O D ) 催化葡萄糖为例: 反应结果, O2 浓度减小, H2O2浓度增大。通过检侧产物凡O : 浓度的变化或氧的消耗t 来侧定底物。 5.2第二代酶生物传感器 为了改进第一代酶生物传感器的缺点, 现在普遍采用的是第二代酶生物传感器, 即介体型酶生物传感器, 它是基于介体的电催化反应。 第二代酶生物传感器采用了含有电子媒介体的化学修饰层。此化学修饰层不仅能促进电子传递过程, 使得响应的线性范围拓宽, 电极的工作电位降低, 同时, 嗓声、背景电流及干扰信号均小, 且由于排除了过氧化氢, 使得酶生物传感器的工作寿命延长。 5.3第三代酶生物传感器 第三代酶生物传感器是醉与电极间进行直接电子传递‘” , 是生物传感器构造中的理想手段。这种传感器与氧或其它电子受体无关, 无需媒介体, 即所谓无媒介体传感器, 但由于醉分子的电活性中心深埋在分子的内部, 且在电极表面吸附后易发生变形, 使得酶与电极间难以进行直接电子转移, 因此采用这种方法制作生物传感器有一定难度。 。 三、酶生物传感器中酶的固定技术 生物活性酶的固定化是生物传感器制备过程中必经的步骤, 酶的固定化技术的发展是提高生物传感器性能的关键因素之一, 对传感器的各项性能起决定作用。一般包括吸附法、包埋法、共价键固定法、交联法等, 如图所示: 1、吸附法: 通过非特异性物理吸附法或生物物质的特异吸附作用将酶固定到载体(如硅藻土、陶瓷、塑料等) 表面, 方法简便, 醉活力不受影响, 但是吸附的静电作用力容易受到反应液中变化的影响。 2、 包埋法: 即载体(如聚丙烯吼胺凝胶、矽酸盐凝胶、藻酸盐、角叉菜聚糖等) 在有醉的存在下发生聚合、沉淀或凝胶化。此法最简单, 但固定后的活力不高, 固定酶的牢度不强。 3 、共价键法;合法: 利用化学方法将载体活化, 再与酶分子上的某些基因反应, 形成共价的化学键, 从而使酶分子结合到载体上, 这是广泛采用的制备固定化酶的方法。 ( 4 ) 交联法: 通过借助交联剂( 具有两个或两个以上功能基的试剂) 在酶分子之间、酶分子与载体之间交联形成网络结构