三年模拟精选 专题二十五.docVIP

A组　基础巩固 1.(2015·天津六校第一次联考)在培育转基因植物的研究中卡那霉素抗性基因(kan)常作为标记基因只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长。下图为获得抗虫棉的技术流程。请据图回答： (1)A过程需要的酶有____。 (2)要把重组质粒导入土壤农杆菌首先必须用________处理土壤农杆菌使土壤农杆菌转变为________态；将________在缓冲液中混合培养完成转化过程。 (3)含有重组质粒的土壤农杆菌侵染离体棉花叶片组织后将离体棉花叶片组织培养成再生植株要经过[D]________和[E]________。如要确保再生植株中含有抗虫基因可在C过程的培养基中加入________。 (4)如想利用分子杂交技术检测再生植株中的抗虫基因是否转录应该用放射性同位素标记的目的基因作为探针与________杂交。 解析　(1)图中A为基因表达载体的构建过程该过程需要限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体还需DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组质粒。 (2)将重组质粒导入微生物细胞时常采用感受态细胞法即首先用Ca＋处理微生物细胞使之成为易于吸收周围环境中DNA分子的感 (3)将离体棉花叶片组织培养成再生植株还需要采用植物组织培养技术该技术包括脱分化和再分化两个过程。由图可知标记基因是卡那霉素抗性基因因此可用含有卡那霉素的培养基筛选含有抗虫基因的再生植株。 (4)检测目的基因是否转录出mRNA常采用分子杂交技术即以标记的目的基因为探针与mRNA分子杂交。 答案　(1)(同一种)限制酶、DNA连接酶(缺一不可) (2)Ca＋　感受　重组质粒和感受态(农杆 (3)脱分化　再分化　卡那霉素 (4)mRNA (2015·北京海淀期中考试)为增加油菜种子的含油量研究人员尝试将酶D基因与位于叶绿体膜上的转运肽基因相连导入油菜细胞并获得了转基因油菜品种。 (1)研究人员依据基因的已知序列设计引物采用________法从陆地棉基因文库中获取酶D基因从拟南芥基因文库中获取转运肽基因。在上述引物设计时分别在引物中加入如图甲所示酶的识________酶处理两个基因后得到________端(填图中字母)相连的融合基因。 (2)将上述融合基因插入图乙所示Ti质粒的T－DNA中构建________并导入农杆菌中。将获得的农杆菌接种在含____________的固体平板上培养得到单菌落再利用______________培养基震荡培养可以得到用于转化的浸染液。 (3)剪取油菜的叶_______________， 进一步筛选后获得转基因油菜。 (4)提取上述转基因油菜的mRNA在________酶的作用下获得cDNA再依据________的DNA片段设计引物进行扩增对扩增结果进行检测可判断融合基因是否完成________。 解析　(1)研究人员依据基因的已知序列设计引物采用PCR法从陆地棉基因文库中获取酶D基因从拟南芥基因文库中获取转运肽基因。在上述引物设计时分别在引物中加入如图甲所示酶的识别序列这样可以用限制酶和DNA连接酶处理两个基因后得到A、D端相连的融合基因。 (2)将上述融合基因插入图乙所示Ti质粒的T－DNA中构建表达载体即重组质粒并导入农杆菌中。将获得的农杆菌接种在含四环素的固体平板上培养得到单菌落再利用液体培养基震荡培养可以得到用于转化的浸染液。 (3)剪取油菜的叶片放入侵染液中一 (4)提取上述转基因油菜的mRNA在逆转录酶的作用下获得再依据融合基因的DNA片段设计引物进行扩增对扩增结果进行检测可判断融合基因是否完成转录。 答案　(1)PCR　(限制酶)和DNA连接　A、D (2)表达载体(或“重组质粒”)　四环素　液体 (3)利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞 (4)逆转录　融合基因　转录 组　能力提升 (2015·江苏如皋期中考试)下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。请回答： (1)天然质粒往往需经过改造才能作为基因工程中的运载体经改造后的质粒同时具备的条件有____________(填序号)。 标记基因　②多个限制酶切割位点　③对受体细胞无害　④启动子　⑤起始密码子 (2)若对图1中质粒进行改造插入的酶切位点越多质粒的热稳定性将会________。 (3)用图2中的人乳铁蛋白目的基因和图1所示的质粒构建重组质粒时选用的限制酶是________(从“、“、“中选择)。不能选择其他限制酶的理由分别是________________。 (4)图3中常用的导入方法是________为了获得雌性转基因牛移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行________过程选用的早期胚胎应发育到______阶段。 解析　(1)天然质粒往往需经过改造才能作为基因工程中的运载体经改造后的质粒同时具备的条件有①标记基因