第十章花药培养分析.pptVIP

第十章 花药培养 杨柏云 南昌大学生命科学学院 花药培养的历史 利用离休培养花药的方法，诱导花粉形成单倍体植株的工作始于1964年（Guha et al. ,1964）。 单倍体植物的主要特点是其孢子体细胞的染色体数目和配子体细胞染色体数目一致，对单倍体植物进行染色体人工加倍之后，即可得到同质结合的纯系，使育成的杂种不再分离，缩短育种年限，加快育种速度。 花药培养的历史 在我国花药培养和单倍体育种方面做了大量的工作，如培养基的研制，雄核发育机理，培育新品种等。由于花药培养的方法日趋完善，培养效率也逐年提高，使这一技术开始被广泛应用于常规杂交育种，逐渐成为作物改良和新品种培育的一个重要手段。 花药培养应注意的问题 1　材料的选择 用作花药培养的亲本植株的基因型、生长情况以及接种时花粉所处的发育时期，对花粉植株的诱导频率都有直接的影响。 花药培养应注意的问题 （1）基因型：实验证明，供体植株的遗传背景对花药培养成败关系甚大。如水稻中粳稻比籼稻容易培养，前者花粉愈伤组织的诱导率平均可达10%，而后者只有1～2%。对各种基因型水稻的测试说明，花药培养力（愈伤组织诱导率和绿苗分化率）的顺序为糯型＞（粳×籼）杂种＞粳型＞籼型杂交稻＞籼型。可见基因型在花药培养中起着关键的作用。 花药培养应注意的问题 （2）生理状态：花药供体植株的生理状态，对花粉愈伤组织的诱导率有直接影响。 对水稻、小麦和大麦等禾本科植物而言，大田植株比温室植株、主茎穗比分蘖穗花粉愈伤组织的诱导率都明显的要高。 花药培养应注意的问题 不同季节接种的花药愈伤组织诱导率也有显著变化。如烟草、小麦早期的花药比晚期的要好，愈伤组织诱导率高，说明供体植株的生态环境，特别是温度和光周期可能对花粉发育及其对离体培养的反应有重要影响。 花药培养应注意的问题 （3）花粉发育时期：不是任何发育时期的花粉都可在离体培养时诱导产生愈伤组织或胚状体，只有那些发育到特定时期的花粉，对离体刺激才最敏感。 实验证明，烟草、曼陀罗和水稻的花粉从单核中期到双核早期都可离体诱导产生愈伤组织。 小麦和玉米处于单核中期的花粉培养效果最好。 天竺葵和番茄分别为四分体和中期I的培养效果最好。 花药培养应注意的问题 可见不同植物的花粉对离体培养有其特定的、最敏感的发育时期。然而，对大多数植物来说，单核期的花粉比较容易培养成功。 检查和确定花粉的发育时期，通常将花粉用醋酸洋红涂片观察，但对水稻和玉米却用KI－I染色较好。 花药培养应注意的问题 2　预处理 为了获得最好的培养效果，在花药培养之前，可先对其进行预处理。 最常用的方法是低温冷藏。具体做法是将带有叶鞘的穗子或花蕾用湿纱布包裹后再用塑料袋套起，放在冰箱中冷藏。 花药培养应注意的问题 不同材料对处理温度的高低有不同的要求，一般耐寒植物比喜温可耐受较低的温度。低温处理时间视使用的温度而定，较低的温度处理时间要短，反之则长。烟草7～9度下处理7～14天，水稻7～10度下处理10～15天，大麦3～7度下处理7～14天，都可显著提高花药的出愈率。但低温处理对小麦的效果不稳定。 花药培养应注意的问题 用冷处理可以增加诱导频率，其原因是：冷处理抑制纺锤体的形成，冷处理不能诱导花药的发育，但它有助于培养花粉的存活。并且阻止配子体分化，导致较高频率的花粉发育。冷处理的作用是间接的，因此不是离体花药成功培养的先决条件。 花药培养应注意的问题 3　材料的表面灭菌 对花药表面灭菌的方法很多，常用的方法有：用市售漂白粉饱和液浸泡10～15分钟；用8～10%安替福民水溶液浸泡5～10分钟；用0.1%升汞浸泡10分钟。如果小花或花蕾包封严密，只须用70%酒精进行仔细擦拭即可。 花药培养应注意的问题 4　获得花粉植株的一般程序 禾本科植物花粉植株的诱导，一般分二步进行。先是将花药接种到含2,4－D1～2mg/l的诱导培养基上，形成愈伤组织。后是在花粉愈伤组织产生后的10～15天，长到直径1～2mm时，及时将其转移到分化培养基上进行植株分化。转移太迟会降低成苗率。 花药培养应注意的问题 分化培养基为去除2,4－D，加入NAA或KT。在分化培养基是，愈伤组织会出现绿点，最后发育成绿色植株。此外，在禾本科植物的花药培养中，常会出现白化苗，目前还没有有效的控制方法。 花药培养应注意的问题 5　培养基成分 培养基成分包括无机盐、碳源、氨基酸、维生素和植物激素等。它们对花药的培养的成功率有明显的作用。先前是用已有的培养基，如MS、Miller和Nitsch等，后来研制出适合不同植物的专用培养基。 花药培养应注意的问题 适合烟草的H培养基（1967）；适合于禾谷类的N6培养基（1975）；适合小麦的C17培养基（1986）、W14培养基（1988）和马铃薯－II培养基（1978）；适合水稻的合5培