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第2节 基因工程及其应用 1.简述基因工程的基本原理。 2.掌握基因工程操作工具的作用。 3.理解基因工程的操作步骤。 1.基因工程的概念理解 2.基因工程的基本工具 (1)基因的“剪刀”: ________________(简称限制酶),具有特异性,即一种限制酶只能识别一种__________________,并在_____________上切割DNA分子。 (2)基因的“针线”:_____________,连接DNA骨架上的________________之间的缺口。 (3)基因的运载体: ①作用:将外源基因送入__________。 ②种类:质粒、______________________等。 ③质粒:存在于许多细菌以及酵母菌等生物中,是细胞染色体外能够_________________________。 [思考探讨] 1.基因工程的原理是什么? 2.如图表示一段DNA序列,请确定限制酶和DNA连接酶的作用部位。 提示: 1.基因重组。 2.都是b。 1.限制性核酸内切酶 (1)分布:主要在微生物体内。 (2)特点:一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列,并在特定的切点上切割DNA分子。 (3)结果:产生两个带有黏性末端或平末端的DNA片段。 2.DNA连接酶 (1)作用对象:把两个具有相同黏性末端或平末端的DNA片段连接起来。 (2)结果:形成重组DNA分子。 (3)DNA连接酶与DNA聚合酶的比较: 3.运载体 (1)作用: ①作为运载工具,将目的基因送入受体细胞中; ②通过它在宿主细胞内的复制对目的基因进行大量复制。 (2)运载体必须具备的条件: ①能在宿主细胞内稳定保存并大量复制——这是保证目的基因能在细胞分裂过程中复制并传递给子细胞。 ②有多个限制酶切点——这是运载体能够接入多种目的基因所必备的条件。 ③有标记基因——这是检测目的基因是否导入受体细胞中的重要判断依据。 (1)基因工程三种工具中,限制酶和DNA连接酶是两种酶工具,前者是切割磷酸二酯键的,后者是连接磷酸二酯键的。 (2)限制酶和DNA连接酶都是一类酶,而不是一种。 1.基因工程的步骤 (1)________________; (2)目的基因与__________结合; (3)将目的基因导入受体细胞; (4)______________________。 2.基因工程的应用 基因工程与作物育种: ①目的:获得高产、稳产和具有优良品质的农作物,培育出具有各种抗逆性的作物新品种。 ②实例:抗棉铃虫的转基因抗虫棉。 ③意义:抗虫转基因作物的使用,不仅减少了农药的用量、大大降低了生产成本,而且还减少了农药对环境的污染。 3.基因工程与药物研制 (1)实例:用基因工程方法生产胰岛素。 (2)过程:胰岛素基因与大肠杆菌的DNA分子重组并且在__________内获得成功的表达。 [思考探讨] 3.生产基因产物的受体细胞为什么常选用微生物? 4.培育转基因动物与转基因植物,常用的受体细胞分别是什么? 提示: 3.因为微生物繁殖快、代谢快、产生的基因产物多。 4.培育转基因动物,一般选用受精卵作为受体细胞;而培育转基因植物,可选用受精卵或体细胞作为受体细胞。 2.目的基因与运载体结合成重组质粒的原因 (1)基本单位相同:都是由脱氧核苷酸构成的。 (2)空间结构相同:都是规则的双螺旋结构。 (3)碱基配对方式相同:都是A—T,G—C。 (1)切割运载体和目的基因时需用同一种限制酶,才能获得相同的黏性末端。 (2)四个步骤中只有第三步将目的基因导入受体细胞不涉及碱基互补配对。 [记知识纲要] [背关键语句] 1.基因工程是按照人们的意愿,把一种生物的某种基因提取出来,加以修饰改造,然后放到另一种生物的细胞里,定向地改造生物的遗传性状。基因工程的原理是基因重组。 2.一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列,并在特定的切点上切割DNA分子。DNA连接酶的作用是将目的基因和运载体连接成重组DNA分子。 3.运载体是将外源基因送入受体细胞,常用的运载体有质粒、噬菌体和动植物病毒等。 4.基因工程的四个步骤是:提取目的基因、目的基因与运载体结合,将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。 某科学家从细菌中分离出耐高温淀粉酶(Amy)基因a,通过基因工程的方法,将基因a与载体结合后导入马铃薯植株中,经检测发现Amy在成熟块茎细胞中存在。下列有关这一过程的叙述错误的是( ) A.获取基因a的限制酶其作用部位是图中的① B.连接基因a与载体的DNA连接酶其作用部位是图中的② C.一般采用同一种限制酶分别处理载体和含目的基因a的DNA D.通过该技术人类实现了定向改造马铃薯的遗传性状 [自主解答] ________ 解析: 由题
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