分光光度计：教案分析.pptVIP

分光光度计 Your logo here 利用分光光度法对物质进行定量定性分析的仪器。 分光光度计 Your logo here 光度定义 基本原理 基本特点 基本用途 操作方法 注意事项 比色方法 1 2 3 4 5 6 7 分光光度计 1 2 3 4 5 6 7 光度定义 基本原理 基本特点 基本用途 操作方法 注意事项 比色方法 分光光度法：是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量的分析。 常用的波长范围 种类 200—400nm的紫外光区 紫外分光光度计 400—760nm的可见光区 可见光分光光度计 2.5 —25 um的红外光区 红外分光光度计 原子吸收分光光度计 分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。 分光光度计 光度定义 基本原理 基本特点 基本用途 操作方法 注意事项 比色方法 1 2 3 4 5 6 7 单色光辐射穿过被测物质溶液时，被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度（光路长度）成正比，其关系式如下： A=-log(I/I。)=-lgT=kLc A：吸光度 k：摩尔吸收系数（物理常数） I：透射的单色光强度 I。：入射的单色光强度 T：物质的透射率 c：物质的浓度 L：被分析物质的光程，即比色皿的边长 样品的吸光值与样品的浓度成正比 分光光度计 光度定义 基本原理 基本特点 基本用途 操作方法 注意事项 比色方法 1 2 3 4 5 6 7 光度定义 基本原理 基本特点 基本用途 操作方法 注意事项 比色方法 分光光度计 1 2 3 4 5 6 7 特点： 灵敏、精确 、快速 、简便 广泛设用于生物化学微量物质的定性定量分析测定 基本部件： 光源 、单色器、比色杯、检测器、显示器 常用的显示器： 记录器、检流计、微安表、数字显示器 可显示： 浓度（C）、透光度（T%）、吸光度（A） 分光光度计 1 2 3 4 5 6 7 光度定义 基本原理 基本特点 基本用途 操作方法 注意事项 比色方法 分光光度计 光度定义 基本原理 基本特点 基本用途 操作方法 注意事项 比色方法 1、核酸的定量：是分光光度计使用频率最高的功能。 2、蛋白质的直接定量（UV法）：适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质。 3、比色法蛋白质定量 4、细菌细胞密度（OD 600） 1 2 3 4 5 6 7 分光光度计 光度定义 基本原理 基本特点 基本用途 操作方法 注意事项 比色方法 1、安装好仪器后，检查样池位置，使其处在光路中（拉动拉手应感应到每档的定位），关好样品室门，打开仪器电源开关，预热10分钟，即可测量。 1 2 3 4 5 6 7 分光光度计 光度定义 基本原理 基本特点 基本用途 操作方法 注意事项 比色方法 1 2 3 4 5 6 7 2、将灵敏度开关调至“1”档（若零点调节器调不到“0”时，需选用较高档。） 分光光度计 光度定义 基本原理 基本特点 基本用途 操作方法 注意事项 比色方法 1 2 3 4 5 6 7 3、根据所需波长转动波长选择钮。 分光光度计 光度定义 基本原理 基本特点 基本用途 操作方法 注意事项 比色方法 1 2 3 4 5 6 7 4、将空白液及测定液分别倒入比色杯3/4处，用擦镜纸擦清外壁，放入样品室内，使空白管对准光路。 分光光度计 光度定义 基本原理 基本特点 基本用途 操作方法 注意事项 比色方法 1 2 3 4 5 6 7 5、在暗箱盖开启状态下调节零点调节器，使读数盘指针指向t=0处。 分光光度计 光度定义 基本原理 基本特点 基本用途 操作方法 注意事项 比色方法 1 2 3 4 5 6 7 6、盖上暗箱盖，调节“100”调节器，使空白管的T=100，指针稳定后逐步拉出样品滑竿，分别读出测定管的光密度值，并记录。 分光光度计 光度定义 基本原理 基本特点 基本用途 操作方法 注意事项 比色方法 1 2 3 4 5 6 7 7、比色完毕，关上电源，取出比色皿洗净，