CRISPRCas概述.pptVIP

规律成簇间隔短回文重复序列再利用， 作为一种RNA引导的序列特异性调控基因表达的平台 type II CRISPR system from Streptococcus pyogenes 基因组范围的定向基因调控是一种探寻、扰乱和编辑细胞系统的有效手段。 这个被我们称作CRISPR干扰的系统，在大肠杆菌中能够有效抑制目的基因的表达，并且没有脱靶现象发生。CRISPRi能够用于多个基因的同时沉默，而且该效应是可逆的。我们也找到了该系统适用于哺乳动物细胞基因表达抑制的证据。 该RNA诱导DNA识别的平台为基因组范围内有选择性的干扰基因表达提供了一个简单的方法。 实验结果 与Cas9共表达的sgRNA分子都由三个片段组成：一个20个核苷酸（nt）位点特异性互补区，一个42nt Cas9结合发夹（Cas9 手柄），和一个40nt来自生脓性链球菌的转录终止子 Growth of E. coli Cell Cultures Cotransformed with dCas9 and sgRNA position on silencing efficiency 利用CRISPRi基因敲除探寻一种内源调控网络 我们分别在IPTG（一种抑制LacZ阻遏物的化合物）有或无两种情况下进行β-半乳糖苷酶实验来测定敲除菌株中LacZ的表达。 结果显示一个LacZ特异性sgRNA能够强烈抑制LacZ的